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TRV介导的马铃薯基因瞬时沉默体系建立及部分抗病相关基因功能初步鉴定

摘要第1-8页
Abstract第8-10页
1 前言第10-21页
   ·病毒诱导基因沉默现象的发现与VIGS的提出第10-11页
   ·VIGS技术的原理和机制第11-15页
     ·VIGS沉默机制第11-13页
     ·VIGS的技术原理第13-15页
   ·植物基因功能基因组VIGS技术常用病毒载体系统及其特点第15-17页
     ·RNA病毒载体第15-17页
     ·DNA病毒载体第17页
     ·卫星病毒载体第17页
   ·VIGS应用于植物功能基因研究的进展第17-19页
     ·VIGS技术的优点和不足第17-19页
       ·VIGS技术的优点第17-18页
       ·VIGS技术的不足第18-19页
     ·应用实例第19页
   ·本课题的提出及研究意义第19-21页
2 材料与方法第21-31页
   ·实验材料第21-25页
     ·植物材料第21-22页
     ·晚疫病原菌第22页
     ·选取基因第22-25页
     ·菌株和质粒及分子生物学相关试剂第25页
   ·实验方法第25-31页
     ·碱裂解法制备质粒DNA第25-26页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化第26-27页
     ·农杆菌感受态细胞的制备及转化第27页
     ·大肠杆菌重组子的酶切和连接第27-28页
     ·农杆菌阳性克隆的PCR鉴定第28-29页
     ·农杆菌侵染马铃薯植株第29页
     ·病毒、病原菌接种第29-30页
     ·Trizol法小量提取马铃薯叶片的RNA第30页
     ·反转录PCR反应(Reverse Transcription-PCR,RT-PCR)第30-31页
3 结果与分析第31-41页
   ·烟草PDS基因沉默植株的表型及VIGS体系的建立第31-32页
   ·马铃薯基因型的筛选第32-33页
   ·基因沉默瞬时表达体系的优化第33-36页
     ·接种方法对基因沉默效率的影响第33-34页
     ·植株的生长状态对基因沉默效果的影响第34页
     ·试管苗、实生苗材料对基因沉默的效率的影响第34-35页
     ·温度和湿度对基因沉默效率的影响第35-36页
   ·利用VIGS研究马铃薯部分基因功能第36-41页
     ·病毒载体的构建第36-38页
       ·大肠杆菌重组子的质粒提取、纯化及酶切鉴定第36-37页
       ·重组病毒载体的农杆菌的PCR鉴定第37-38页
     ·部分基因沉默叶片目的基因沉默效果分析第38-39页
     ·基因沉默株系叶片晚疫病抗性分析第39-41页
4 讨论第41-44页
   ·马铃薯不同基因型对VIGS的影响第41页
   ·温度与湿度第41-42页
   ·植株生长状态第42页
   ·试管苗与实生苗第42-43页
   ·接种方法第43页
   ·基因沉默的效率第43-44页
参考文献第44-53页
附录第53-58页
致谢第58页

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