| 摘要 | 第1-16页 |
| ABSTRACT | 第16-19页 |
| 符号说明 | 第19-20页 |
| 第一章 前言 | 第20-34页 |
| 1 谷胱甘肽的理化性质 | 第20-21页 |
| 2 谷胱甘肽的生物合成途径 | 第21页 |
| 3 谷胱甘肽的生理功能与应用 | 第21-23页 |
| 4 谷胱甘肽的制备 | 第23-27页 |
| ·溶剂提取法 | 第23页 |
| ·化学合成法 | 第23页 |
| ·酶法 | 第23页 |
| ·发酵法 | 第23-27页 |
| 5 分离纯化研究 | 第27-28页 |
| 6 透明颤菌血红蛋白及其应用研究进展 | 第28-32页 |
| ·透明颤菌血红蛋白简介 | 第28-29页 |
| ·透明颤菌血红蛋白的结构与特性 | 第29页 |
| ·透明颤菌血红蛋白基因功能机制 | 第29-30页 |
| ·vgb基因的克隆与表达 | 第30-31页 |
| ·透明颤菌血红蛋白在发酵中的应用 | 第31-32页 |
| 7 本课题的研究内容与意义 | 第32-34页 |
| 第二章 高产谷胱甘肽酵母菌株的诱变选育 | 第34-52页 |
| 1 实验材料 | 第34-35页 |
| ·菌株 | 第34页 |
| ·实验仪器 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34-35页 |
| ·培养基 | 第35页 |
| ·常用溶液的配制 | 第35页 |
| 2 实验方法与步骤 | 第35-38页 |
| ·细胞生物量的测定 | 第35页 |
| ·GSH含量的测定 | 第35-36页 |
| ·GSH的提取 | 第36页 |
| ·生长曲线的测定 | 第36页 |
| ·诱变育种及筛选方法 | 第36-38页 |
| ·发酵条件的初步优化 | 第38页 |
| 3 实验结果 | 第38-49页 |
| ·ALLOXAN试剂法测定GSH含量的标准曲线 | 第38-39页 |
| ·热水抽提法提取GSH的条件优化 | 第39-40页 |
| ·出发菌株生长曲线的测定 | 第40页 |
| ·NTG诱变剂量的确定 | 第40-41页 |
| ·紫外诱变剂量的确定 | 第41-42页 |
| ·ZnCl_2抗性筛选浓度的选择 | 第42页 |
| ·硫氨酸抗性筛选物的选择 | 第42-43页 |
| ·GSH高产菌的筛选 | 第43页 |
| ·发酵条件的优化 | 第43-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 5 小结 | 第51-52页 |
| 第三章 透明颤菌血红蛋白(VHb)在产谷胱甘肽酿酒酵母中的表达 | 第52-71页 |
| 1 实验材料 | 第52-54页 |
| ·菌株及载体 | 第52页 |
| ·培养基 | 第52页 |
| ·分子生物学试剂 | 第52-53页 |
| ·常用仪器 | 第53页 |
| ·常用溶液配制 | 第53-54页 |
| 2 实验方法与步骤 | 第54-60页 |
| ·目的基因的克隆 | 第54页 |
| ·目的基因回收与纯化 | 第54页 |
| ·目的基因的单酶切 | 第54-55页 |
| ·酶切片段的去磷酸化 | 第55页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第55-56页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第56页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第56-57页 |
| ·大肠杆菌中质粒的提取 | 第57页 |
| ·重组质粒的酶切验证和vgb基因连接方向的PCR验证 | 第57页 |
| ·重组载体的DNA测序鉴定 | 第57页 |
| ·酿酒酵母对G418敏感度的测定 | 第57页 |
| ·酿酒酵母转化 | 第57-58页 |
| ·重组酿酒酵母基因组的提取 | 第58页 |
| ·重组酿酒酵母转化子的筛选 | 第58页 |
| ·高拷贝转化子的筛选 | 第58页 |
| ·转化子稳定性的测定 | 第58-59页 |
| ·血红蛋白活性的测定方法 | 第59页 |
| ·不同供氧条件下VHb对酿酒酵母生长的影响 | 第59-60页 |
| 3 结果与讨论 | 第60-68页 |
| ·重组载体的构建 | 第60-63页 |
| ·表达VHb的酿酒酵母工程菌株的构建 | 第63-68页 |
| 4 讨论 | 第68-69页 |
| 5 本章小结 | 第69-71页 |
| 第四章 响应面法优化产GSH酿酒酵母重组菌的发酵条件 | 第71-81页 |
| 1 实验材料 | 第71-72页 |
| ·菌株 | 第71页 |
| ·试剂 | 第71页 |
| ·实验仪器 | 第71页 |
| ·培养基 | 第71-72页 |
| 2 实验方法 | 第72-74页 |
| ·培养方法 | 第72页 |
| ·GSH含量测定 | 第72页 |
| ·GSH的提取 | 第72页 |
| ·响应面法优化发酵条件 | 第72-74页 |
| 3 结果与讨论 | 第74-79页 |
| ·Plackett-Burman设计实验结果及分析 | 第74-75页 |
| ·Box-Behnken设计 | 第75-79页 |
| 4 讨论 | 第79-80页 |
| 5 本章小结 | 第80-81页 |
| 第五章 从酿酒酵母中分离纯化谷胱甘肽的研究 | 第81-90页 |
| 1 实验材料 | 第81-82页 |
| ·实验菌株 | 第81页 |
| ·实验试剂 | 第81页 |
| ·实验仪器 | 第81-82页 |
| ·培养基 | 第82页 |
| 2 实验方法 | 第82-83页 |
| ·GSH含量测定方法 | 第82页 |
| ·GSH溶液在不同pH值下的稳定性 | 第82页 |
| ·两种抽提方法的比较 | 第82页 |
| ·超滤分离 | 第82-83页 |
| ·阳离子交换树脂的预处理与再生 | 第83页 |
| ·阳离子交换层析分离纯化发酵液中的GSH | 第83页 |
| 3 实验结果 | 第83-88页 |
| ·不同pH值下的GSH溶液稳定性 | 第83-84页 |
| ·乙醇抽提方法的研究 | 第84-85页 |
| ·两种抽提方法的比较 | 第85页 |
| ·超滤实验 | 第85-86页 |
| ·阳离子交换法纯化GSH | 第86-88页 |
| 4 讨论 | 第88页 |
| 5 本章小结 | 第88-90页 |
| 全文总结与展望 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 攻读学位期间科研成果 | 第100-101页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第101页 |
