| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 引言 | 第14-25页 |
| ·流感与流感病毒 | 第14-15页 |
| ·流感 | 第14页 |
| ·流感病毒 | 第14-15页 |
| ·中国大陆猪流感病毒流行特征及未来值得关注的几个问题 | 第15-19页 |
| ·中国大陆SIV流行特征 | 第15-17页 |
| ·未来值得关注的几个问题 | 第17-19页 |
| ·猪流感疫苗研究进展 | 第19-24页 |
| ·灭活疫苗 | 第19-20页 |
| ·弱毒疫苗 | 第20-21页 |
| ·病毒活载体亚单位疫苗 | 第21-22页 |
| ·基因工程DNA疫苗 | 第22-23页 |
| ·已应用于人或其他动物流感但尚未在SIV上应用的疫苗研发系统 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-43页 |
| ·甲型H1N1流感病毒特异性抗原捕获ELISA方法的建立 | 第25-37页 |
| ·质粒、菌株、病毒及细胞 | 第25页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第25页 |
| ·重组A/Brisbane/59/2007(H1N1)[BR07]毒株HA蛋白的PR8病毒的构建 | 第25-27页 |
| ·r07、r09的纯化及全病毒多抗的制备 | 第27页 |
| ·BR07HA与CA09HA基因在杆状病毒中的表达 | 第27-29页 |
| ·特异性识别大流行流感病毒的单克隆抗体的制备 | 第29-31页 |
| ·单抗的抗原表位鉴定 | 第31-35页 |
| ·甲型H1N1流感病毒特异性抗原捕获ELISA方法的建立 | 第35-37页 |
| ·整合大流行性H1N1流感病毒血凝素蛋白的伪型病毒的构建 | 第37-38页 |
| ·载体、血清及主要试剂 | 第37页 |
| ·表达HA基因的真核表达载体的构建及鉴定 | 第37页 |
| ·伪型病毒的包装 | 第37-38页 |
| ·报告基因LacZ表达检测 | 第38页 |
| ·伪型病毒感染的中和试验 | 第38页 |
| ·统计学分析 | 第38页 |
| ·通用型猪流感疫苗基础研究 | 第38-43页 |
| ·质粒、毒株、细胞、血清 | 第38-39页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第39页 |
| ·DNA疫苗的设计 | 第39页 |
| ·重组质粒的构建及验证 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的体外表达 | 第40页 |
| ·基因枪子弹的制备 | 第40-41页 |
| ·小鼠的免疫及攻毒 | 第41页 |
| ·血清学试验 | 第41页 |
| ·IFN-γ ELISPOT | 第41-42页 |
| ·攻毒后小鼠肺脏的病毒滴定 | 第42页 |
| ·组织病理学观察 | 第42页 |
| ·统计学分析 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-62页 |
| ·甲型H1N1流感病毒特异性抗原捕获ELISA方法的建立 | 第43-54页 |
| ·PBD-07HA重组质粒的PCR鉴定 | 第43页 |
| ·拯救病毒r07核酸序列验证 | 第43页 |
| ·拯救病毒r07的HA滴度测定 | 第43页 |
| ·重组杆粒的PCR鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组杆状病毒的获得 | 第44页 |
| ·HA蛋白在细胞表面的表达 | 第44-45页 |
| ·特异性识别r09单抗的筛选 | 第45-46页 |
| ·血凝抑制试验及中和试验 | 第46页 |
| ·抗原表位的鉴定及5B12对r07、r09差异性识别的分子基础 | 第46-50页 |
| ·该表位不能被全病毒阳性血清识别 | 第50-51页 |
| ·抗原表位的保守性分析 | 第51页 |
| ·抗原捕获ELISA方法的建立 | 第51-54页 |
| ·整合大流行性H1N1流感病毒血凝素蛋白的伪型病毒的构建 | 第54-56页 |
| ·HA基因表达载体的构建及在293T细胞中的表达 | 第54-55页 |
| ·HA蛋白整合的伪型病毒粒子具有感染性 | 第55页 |
| ·伪型病毒对细胞的感染可被阳性血清所中和 | 第55-56页 |
| ·通用型猪流感疫苗基础研究 | 第56-62页 |
| ·M2e、NP147-155及共有HA基因的扩增 | 第56页 |
| ·DNA疫苗的构建及鉴定 | 第56-57页 |
| ·DNA疫苗携带的外源基因在293T细胞中的表达 | 第57-58页 |
| ·两种DNA疫苗能有效刺激机体产生HA及M2e特异性抗体 | 第58页 |
| ·DNA疫苗诱导机体产生的HI抗体效价水平 | 第58-59页 |
| ·MNHa能够诱导NP147-155特异性的T细胞免疫应答 | 第59页 |
| ·MNHa比MHa显示出更强的异源保护效力 | 第59-60页 |
| ·MNHa能够比MHa更显著地抑制异源毒株攻击后小鼠肺脏发生的病变 | 第60-62页 |
| 4 讨论 | 第62-66页 |
| ·甲型H1N1流感病毒特异性抗原捕获ELISA方法的建立 | 第62-63页 |
| ·整合大流行性H1N1流感病毒血凝素蛋白的伪型病毒的构建 | 第63-64页 |
| ·通用型猪流感疫苗基础研究 | 第64-66页 |
| 5 结论 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-78页 |
| 附录 | 第78-79页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第79页 |
