| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-26页 |
| ·己烯雌酚和双烯雌酚的理化性质 | 第18-19页 |
| ·己烯雌酚和双烯雌酚的应用及危害 | 第19-20页 |
| ·己烯雌酚和双烯雌酚的残留 | 第20页 |
| ·己烯雌酚和双烯雌酚主要检测方法 | 第20-24页 |
| ·气相色谱法 | 第21页 |
| ·高效液相色谱法 | 第21-22页 |
| ·气相色谱-质谱 | 第22页 |
| ·液相色谱-质谱 | 第22-23页 |
| ·毛细管电泳法 | 第23页 |
| ·放射免疫法 | 第23页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 己烯雌酚和双烯雌酚人工抗原的合成与鉴定 | 第26-37页 |
| ·实验材料 | 第26-27页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·主要设备 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-29页 |
| ·己烯雌酚人工抗原的合成 | 第27-29页 |
| ·己烯雌酚-单羧基丙基醚（DES-CP）的合成 | 第27页 |
| ·己烯雌酚-半琥珀酸（DES-HS）的合成 | 第27页 |
| ·己烯雌酚-单羧基甲醚（DES-CM）的合成 | 第27页 |
| ·己烯雌酚-单羧基丙基醚-BSA（DES-CP-BSA）的制备 | 第27页 |
| ·己烯雌酚-单羧基丙基醚-OVA（DES-CP-OVA）的制备 | 第27页 |
| ·己烯雌酚-半琥珀酸-OVA（DES-HS-OVA）的制备 | 第27页 |
| ·己烯雌酚-单羧基甲醚-OVA（DES-CM-OVA）的制备 | 第27-29页 |
| ·双烯雌酚人工抗原的合成 | 第29页 |
| ·双烯雌酚-单羧基丙基醚（DIEN-CP）的合成 | 第29页 |
| ·双烯雌酚-半琥珀酸（DIEN-HS）的合成 | 第29页 |
| ·双烯雌酚-单羧基丙基醚-BSA（DIEN-CP-BSA）的制备 | 第29页 |
| ·双烯雌酚-半琥珀酸-OVA（DIEN-HS-OVA）的制备 | 第29页 |
| ·人工抗原合成的分析 | 第29页 |
| ·结果 | 第29-35页 |
| ·紫外分析 | 第29-32页 |
| ·质谱分析 | 第32-34页 |
| ·人工抗原浓度的测定 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| ·半抗原的合成 | 第35页 |
| ·偶联比 | 第35-36页 |
| ·小结 | 第36-37页 |
| 第三章 己烯雌酚多克隆抗体的制备及鉴定 | 第37-46页 |
| ·实验材料 | 第37-38页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要设备 | 第37页 |
| ·试验动物 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-40页 |
| ·动物免疫 | 第38页 |
| ·血清效价测定 | 第38-39页 |
| ·血清竞争抑制筛选 | 第39页 |
| ·建立DES 间接竞争ELISA 标准曲线 | 第39页 |
| ·抗血清特异性的测定 | 第39-40页 |
| ·结果 | 第40-43页 |
| ·多抗效价测定 | 第40页 |
| ·多抗竞争抑制测定 | 第40-42页 |
| ·己烯雌酚间接竞争ELISA 标准曲线 | 第42-43页 |
| ·交叉反应 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| ·半抗原与载体蛋白 | 第43-44页 |
| ·免疫与抗体检测 | 第44-45页 |
| ·间隔臂的影响 | 第45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 第四章 己烯雌酚和双烯雌酚单克隆抗体的制备及鉴定 | 第46-63页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·主要试剂 | 第46-47页 |
| ·主要设备 | 第47页 |
| ·试验动物 | 第47页 |
| ·主要试剂配制 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-53页 |
| ·小鼠免疫 | 第47-48页 |
| ·骨髓瘤细胞的准备 | 第48页 |
| ·脾细胞的准备 | 第48-49页 |
| ·饲养细胞的准备 | 第49页 |
| ·细胞融合 | 第49页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第49-50页 |
| ·杂交瘤细胞克隆化 | 第50页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第50-51页 |
| ·腹水的制备 | 第51页 |
| ·腹水的纯化 | 第51页 |
| ·单克隆抗体特性的鉴定 | 第51-53页 |
| ·单克隆抗体的SDS-PAGE 电泳鉴定 | 第51-52页 |
| ·杂交瘤细胞的染色体分析 | 第52页 |
| ·单克隆抗体的亚型分析 | 第52-53页 |
| ·结果 | 第53-61页 |
| ·小鼠血清效价测定 | 第53-54页 |
| ·小鼠血清竞争抑制测定 | 第54-55页 |
| ·SP2/0 细胞的培养和观察 | 第55页 |
| ·杂交瘤细胞的培养和观察 | 第55-57页 |
| ·杂交瘤细胞的阳性筛选、克隆和建株 | 第57页 |
| ·纯化腹水单克隆抗体浓度的测定 | 第57页 |
| ·杂交瘤细胞染色体分析 | 第57-58页 |
| ·单克隆抗体纯度的测定 | 第58-59页 |
| ·单克隆抗体的亚型分析 | 第59-60页 |
| ·单克隆抗体效价的测定 | 第60页 |
| ·杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-62页 |
| ·动物免疫 | 第61页 |
| ·融合与筛选及克隆 | 第61-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 第五章 己烯雌酚和双烯雌酚间接竞争ELISA 方法的建立 | 第63-83页 |
| ·实验材料 | 第63-64页 |
| ·主要试剂 | 第63页 |
| ·主要设备 | 第63-64页 |
| ·实验方法 | 第64-65页 |
| ·ELISA 条件的优化 | 第64页 |
| ·包被原和抗体最佳工作浓度的选择 | 第64页 |
| ·包被方式的选择 | 第64页 |
| ·封闭时间的选择 | 第64页 |
| ·一抗反应时间的选择 | 第64页 |
| ·酶标二抗反应时间的选择 | 第64页 |
| ·离子强度的影响 | 第64-65页 |
| ·pH 的影响 | 第65页 |
| ·己烯雌酚和双烯雌酚ELISA 参数的确定 | 第65页 |
| ·ELISA 标准曲线的建立 | 第65页 |
| ·特异性分析 | 第65页 |
| ·检测限和定量限的确定 | 第65页 |
| ·精密度的测定 | 第65页 |
| ·保存期试验 | 第65页 |
| ·添加回收测定 | 第65-66页 |
| ·实测样品 | 第66页 |
| ·与国外试剂盒比较 | 第66页 |
| ·结果 | 第66-80页 |
| ·包被原和抗体工作浓度的确定 | 第66-68页 |
| ·包被方式的确定 | 第68-69页 |
| ·封闭时间的确定 | 第69-70页 |
| ·一抗反应时间的确定 | 第70-71页 |
| ·酶标二抗反应时间的确定 | 第71-72页 |
| ·离子强度的确定 | 第72-73页 |
| ·pH 的确定 | 第73页 |
| ·DES 和DIEN 间接竞争ELISA 标准曲线 | 第73-75页 |
| ·特异性分析 | 第75-76页 |
| ·检测限和定量限的确定 | 第76-77页 |
| ·精密度的确定 | 第77-78页 |
| ·保存期试验 | 第78-79页 |
| ·添加回收率 | 第79-80页 |
| ·实际样品检测结果 | 第80页 |
| ·讨论 | 第80-81页 |
| ·ELISA 的影响因素 | 第80-81页 |
| ·样品提取与净化 | 第81页 |
| ·小结 | 第81-83页 |
| 第六章 全文结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 作者简历 | 第93页 |
