| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 综述 | 第9-22页 |
| 1 自然界存在的可再生资源—半纤维素 | 第9页 |
| 2 木聚糖的结构和组成 | 第9-10页 |
| 3 半纤维素物质的水解方法 | 第10页 |
| 4 木聚糖降解酶系 | 第10-12页 |
| 5 木糖苷酶的研究进展 | 第12-19页 |
| ·β-木糖苷酶的分类 | 第12-13页 |
| ·β-木糖苷酶的酶学性质 | 第13-16页 |
| ·β-木糖苷酶的催化机制和结构特点 | 第16-18页 |
| ·β-木糖苷酶的基因工程 | 第18-19页 |
| 6 β-木糖苷酶的应用前景 | 第19-20页 |
| 7 立题背景及本文研究内容 | 第20-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-37页 |
| 1 材料 | 第22-26页 |
| ·菌种与质粒 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·主要试剂及其来源 | 第23-25页 |
| ·主要仪器设备及其来源 | 第25-26页 |
| 2 方法 | 第26-37页 |
| ·计算机软件 | 第26页 |
| ·引物设计和PCR扩增xylC基因 | 第26页 |
| ·系列突变引物设计及反向PCR扩增 | 第26-28页 |
| ·基因操作 | 第28页 |
| ·DNA连接反应 | 第28页 |
| ·电转化感受态细胞的制备 | 第28页 |
| ·电转化 | 第28-29页 |
| ·木糖苷酶基因xylC在大肠杆菌中的表达 | 第29页 |
| ·木糖苷酶的高密度诱导培养及在TB培养基中诱导条件的优化 | 第29-30页 |
| ·木糖苷酶活性的测定 | 第30-31页 |
| ·聚丙烯酰氨凝胶电泳 | 第31页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第31-32页 |
| ·重组木糖苷酶XylC的分离纯化 | 第32-34页 |
| ·重组酶的性质的测定方法 | 第34-37页 |
| 第三章 结果 | 第37-61页 |
| 1 重组质粒pHsh-xylC的构建及鉴定分析 | 第37-39页 |
| 2 重组质粒pHsh-xyl(Ⅰ-Ⅴ)的构建及鉴定分析 | 第39-47页 |
| ·重组质粒pHsh-xylⅠ的构建及鉴定分析 | 第39-41页 |
| ·重组质粒pHsh-xylⅡ的构建及鉴定分析 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pHsh-xylⅢ的构建及鉴定分析 | 第42-44页 |
| ·重组质粒pHsh-xylⅣ的构建及鉴定分析 | 第44-46页 |
| ·重组质粒pHsh-xylⅤ的构建及鉴定分析 | 第46-47页 |
| 3 突变前后基因序列 | 第47页 |
| 4 xy1C基因在大肠杆菌中的表达 | 第47-49页 |
| 5 突变效果的对比 | 第49-52页 |
| ·突变前后酶活的比较 | 第49-51页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第51-52页 |
| 6 重组木糖苷酶在TB培养基中诱导条件的优化 | 第52-53页 |
| ·不同诱导时机对酶活的影响 | 第52-53页 |
| ·不同诱导时间对酶活的影响 | 第53页 |
| 7 木糖苷酶的纯化 | 第53-55页 |
| 8 重组木糖苷酶的酶学性质分析 | 第55-61页 |
| ·重组木糖苷酶的最适反应条件 | 第55-56页 |
| ·重组木糖苷酶的稳定性 | 第56-57页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第57-58页 |
| ·D-木糖及木素类似物对酶活的影响 | 第58-59页 |
| ·纯酶的底物专一性 | 第59页 |
| ·酶的动力学参数测定 | 第59-61页 |
| 第四章 讨论 | 第61-66页 |
| 1 载体的选择及对表达的影响 | 第61页 |
| 2 xylC基因的定向改造及其对表达的影响 | 第61-63页 |
| 3 重组木糖苷酶纯化的研究 | 第63页 |
| 4 重组木糖苷酶的酶学性质研究 | 第63-66页 |
| 主要结论 | 第66-67页 |
| 创新之处 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 致谢 | 第75页 |