| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 缩略语 | 第14-16页 |
| 引言 | 第16-21页 |
| 第1章 IPF7817基因敲除菌的构建与鉴定 | 第21-53页 |
| 1.材料 | 第22-27页 |
| ·菌株和质粒 | 第22-24页 |
| ·试剂及配制 | 第24-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-27页 |
| 2.方法 | 第27-32页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第27页 |
| ·DNA酶切反应 | 第27页 |
| ·凝胶中DNA片段的回收 | 第27-28页 |
| ·DNA连接反应 | 第28页 |
| ·DNA片段的去磷酸反应 | 第28页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备和转化 | 第28-29页 |
| ·白念珠菌的转化 | 第29页 |
| ·白念珠菌基因组DNA的抽提 | 第29-30页 |
| ·PCR反应 | 第30-31页 |
| ·Southern杂交 | 第31-32页 |
| ·DNA测序和序列分析 | 第32页 |
| 3.结果 | 第32-50页 |
| ·基因测序 | 第32-36页 |
| ·基因全长的确定 | 第36-42页 |
| ·用于基因敲除的质粒的构建与鉴定 | 第42-45页 |
| ·IPF7817基因敲除菌的构建与鉴定 | 第45-50页 |
| 4.讨论 | 第50-53页 |
| 第2章 IPF7817参与白念珠菌细胞内氧化还原态的调节 | 第53-70页 |
| 1.材料 | 第53-55页 |
| ·菌株 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53-54页 |
| ·仪器 | 第54-55页 |
| 2.方法 | 第55-61页 |
| ·生长曲线测定 | 第55页 |
| ·对外源性H_2O_2、温度及渗透刺激的耐受力实验 | 第55-56页 |
| ·细胞内活性氧ROS水平检测 | 第56-57页 |
| ·线粒体膜电位的测定 | 第57页 |
| ·Real-time RT-PCR测定氧化还原相关基因的表达 | 第57-60页 |
| ·氧化型和还原型谷胱甘肽含量测定 | 第60-61页 |
| 3.结果 | 第61-68页 |
| ·IPF7817基因对于生长曲线的影响 | 第61-62页 |
| ·IPF7817基因对外源性H_2O_2、温度及渗透刺激的影响 | 第62-63页 |
| ·IPF7817基因敲除对细胞内ROS的影响 | 第63-64页 |
| ·IPF7817基因敲除对线粒体膜电位的影响 | 第64-65页 |
| ·IPF7817基因敲除对氧化还原相关基因的影响 | 第65-67页 |
| ·IPF7817基因敲除对[GSH]/[GSSG]含量比的影响 | 第67-68页 |
| 4.讨论 | 第68-70页 |
| 第3章 IPF7817基因对白念珠菌耐药性形成的影响 | 第70-92页 |
| 1.材料 | 第70-72页 |
| ·菌株 | 第70-71页 |
| ·药品与试剂 | 第71-72页 |
| ·仪器 | 第72页 |
| 2.方法 | 第72-76页 |
| ·药物敏感性实验 | 第72-74页 |
| ·氟康唑诱导耐药实验 | 第74页 |
| ·体外耐药稳定性研究 | 第74页 |
| ·Real-time RT-PCR检测耐药相关基因表达 | 第74-75页 |
| ·罗丹明6G外转运实验 | 第75页 |
| ·菌丝培养及观察 | 第75-76页 |
| ·生物被膜培养及观察 | 第76页 |
| 3.结果 | 第76-88页 |
| ·IPF7817基因对白念珠菌耐药性的影响 | 第76-77页 |
| ·IPF7817基因对罗丹明6G外排的影响 | 第77-78页 |
| ·IPF7817敲除对白念珠菌耐药相关基因表达的影响 | 第78-79页 |
| ·氟康唑诱导耐药 | 第79-86页 |
| ·IPF7817基因对菌丝形成的影响 | 第86-87页 |
| ·IPF7817基因缺失对白念珠菌生物被膜形成的影响 | 第87-88页 |
| 4.讨论 | 第88-92页 |
| 总结 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 附录 | 第103页 |
