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新型抗虫ω-芋螺毒素基因MiEN的克隆

摘要第1-4页
ABSTRACT第4-8页
1 前言第8-31页
   ·芋螺第8-12页
     ·芋螺进入人类历史第8-9页
     ·芋螺生物学特征第9-11页
     ·芋螺的进化第11页
     ·芋螺资源第11-12页
   ·芋螺毒素第12-16页
     ·生物化学第12-13页
     ·分子生物学第13-14页
     ·分类和命名第14-16页
     ·应用领域第16页
   ·芋螺毒素的药理学活性第16-26页
     ·电压门控离子通道阻断剂第16-22页
     ·配体门控离子通道阻断剂第22-25页
     ·其它第25-26页
   ·芋螺毒素研究现状第26-28页
   ·展望第28-29页
   ·本研究的目的和意义第29-30页
   ·本研究的技术路线第30-31页
2 材料与方法第31-43页
   ·材料第31页
     ·芋螺材料第31页
     ·菌种第31页
     ·生化试剂第31页
     ·仪器第31页
   ·方法第31-43页
     ·芋螺解剖第31页
     ·勇士芋螺毒管总RNA的提取第31-33页
     ·勇士芋螺DNA提取方法的优化第33-35页
     ·勇士芋螺总DNA的酶解第35页
     ·勇士芋螺RNA反转录合成cDNA第35页
     ·ω-芋螺毒素MiEN基因组基因的PCR扩增第35-36页
     ·ω-芋螺毒素基因MiEN cDNA的3’-RACE扩增第36-37页
     ·PCR产物的回收第37页
     ·PCR产物的克隆第37-40页
     ·重组子测序第40页
     ·测序后重组质粒的中量提取第40页
     ·测序后重组质粒酶切和PCR鉴定第40-41页
     ·测序后重组质粒的保存第41页
     ·序列分析第41页
     ·ω-芋螺毒素MiEM的合成、氧化复性和分离纯化第41页
     ·活性鉴定第41-43页
3 结果与分析第43-53页
   ·勇士芋螺形态特征和毒管解剖第43页
   ·勇士芋螺毒管总RNA的提取效果第43-44页
   ·勇士芋螺毒管cDNA合成的效果第44-45页
   ·勇士芋螺基因组DNA提取效果第45-48页
     ·四种提取方法的比较第45-47页
     ·勇士芋螺不同组织器官的DNA含量第47-48页
   ·ω-芋螺毒素基因组基因MiENG的PCR扩增第48-49页
   ·ω-芋螺毒素cDNAMiEN的PCR扩增第49页
   ·MiEN基因的序列分析第49-52页
   ·毒素MiEM的化学合成和氧化折叠纯化第52页
   ·毒素MiEM的抗虫活性第52-53页
4 讨论第53-56页
   ·关于克隆芋螺毒素基因组基因的模板问题第53页
   ·关于用3’-RACE克隆芋螺毒素cDNA的问题第53-54页
   ·ω-芋螺毒素新基因克隆的策略第54-55页
   ·抗虫ω-芋螺毒素的应用前景及研究展望第55-56页
5 结论第56-57页
参考文献第57-66页
致谢第66页

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