| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-14页 |
| 引言 | 第14-26页 |
| 1 禽白血病病毒的基本概况 | 第14-15页 |
| 2 ALV-J分子病毒学特性 | 第15-16页 |
| 3 ALV-J的致病性及其免疫抑制作用 | 第16-18页 |
| 4 ALV-J的鉴别与诊断 | 第18-21页 |
| 5 ALV-J囊膜糖蛋白基因的变异 | 第21-22页 |
| 6 免疫选择压对病毒演化的影响 | 第22-23页 |
| 7 ALV-J的控制与消灭 | 第23页 |
| 8 本研究的目的及意义 | 第23-25页 |
| 9 附图 | 第25-26页 |
| 研究内容 | 第26-78页 |
| 试验一 在抗体免疫选择压作用下鸡J亚群白血病病毒gp85基因的变异 | 第26-40页 |
| 1 材料与方法 | 第26-33页 |
| ·鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备 | 第26页 |
| ·ALV-J中国分离株NX0101 | 第26页 |
| ·单克隆抗体 | 第26页 |
| ·异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗鼠和兔抗鸡二抗 | 第26-27页 |
| ·引物 | 第27页 |
| ·鸡抗ALV-J NX0101单因子血清的制备及其效价的测定 | 第27-28页 |
| ·单因子血清中ALV-J病毒的检测 | 第28页 |
| ·抗体在37℃温箱中36h后的抗体效价 | 第28页 |
| ·ALV-J NX0101株单因子血清的病毒中和试验 | 第28页 |
| ·在含有单因子血清的CEF上NX0101株的连续传代 | 第28-29页 |
| ·第10代、20代和30代病毒env基因的扩增、克隆与测序 | 第29-33页 |
| ·克隆载体和宿主菌 | 第29页 |
| ·分子生物学试剂 | 第29页 |
| ·第10代、20代和30代病毒模板的制备 | 第29页 |
| ·第10代、20代和30代病毒env基因的扩增 | 第29-30页 |
| ·第10代、20代和30代病毒env基因PCR产物DNA电泳 | 第30-31页 |
| ·PCR产物的回收与定量 | 第31页 |
| ·DNA的连接反应 | 第31页 |
| ·TG1大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| ·连接产物的转化 | 第32页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·重组质粒DNA的酶切鉴定 | 第33页 |
| ·阳性克隆序列测定 | 第33页 |
| 2 结果 | 第33-40页 |
| ·鸡抗NX0101株病毒单因子血清的效价 | 第33-34页 |
| ·单因子血清中ALV-J病毒的检测 | 第34页 |
| ·培养基中不完全抑制ALV-J复制的最适血清浓度的确定 | 第34页 |
| ·抗体在37℃温箱中36h后的抗体效价 | 第34页 |
| ·第10代、20代和30代病毒env基因PCR扩增结果 | 第34页 |
| ·第10代、20代和30代病毒env基因重组质粒的双酶切鉴定结果 | 第34-35页 |
| ·在不含抗体培养基上连续传代病毒gp85基因的变异 | 第35-36页 |
| ·在含抗体的培养基上连续传代病毒gp85基因的变异 | 第36-37页 |
| ·原代病毒分别与有、无抗体组gp85氨基酸序列差异性程度比较 | 第37-38页 |
| ·不同传代系列高变区上重复变异位点的规律 | 第38页 |
| ·gp85及其3个高变区上NS与S的比值 | 第38-40页 |
| 试验一 附图 | 第40-52页 |
| 试验二 ALV-J田间野毒株的分离鉴定及1999-2003年期间我国ALV-J野毒株gp85基因变异趋势 | 第52-78页 |
| 1 材料与方法 | 第52-60页 |
| ·鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备 | 第52页 |
| ·病料来源 | 第52页 |
| ·单克隆抗体 | 第52页 |
| ·异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗鼠二抗 | 第52页 |
| ·引物 | 第52-53页 |
| ·阳性对照ALV-J病毒 | 第53页 |
| ·病毒分离鉴定 | 第53-56页 |
| ·病毒分离与复制 | 第53页 |
| ·间接免疫荧光试验(IFA) | 第53-54页 |
| ·细胞DNA的提取 | 第54-55页 |
| ·特异性2.2kb条带扩增 | 第55-56页 |
| ·PCR产物DNA电泳 | 第56页 |
| ·env基因的克隆与测序 | 第56-59页 |
| ·克隆载体和宿主菌 | 第56页 |
| ·分子生物学试剂 | 第56页 |
| ·PCR产物的回收与定量 | 第56-57页 |
| ·DNA的连接反应 | 第57页 |
| ·TG1大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第57页 |
| ·连接产物的转化 | 第57-58页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第58-59页 |
| ·重组质粒DNA的酶切鉴定 | 第59页 |
| ·阳性克隆序列测定 | 第59页 |
| ·1999—2003年期间分离的中国野毒株的背景 | 第59-60页 |
| 2 结果 | 第60-72页 |
| ·用ALV-J特异性单克隆抗体IFA检测结果 | 第60页 |
| ·特异性2.2kb条带扩增结果 | 第60-61页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定结果 | 第61页 |
| ·14个ALV-J中国分离株与原型株HPRS-103的Gp85蛋白氨基酸序列分析 | 第61页 |
| ·十四个ALV-J中国分离株与原型株HPRS-103的Gp85蛋白氨基酸序列的同源性比较 | 第61-63页 |
| ·14株中国野毒株Gp85蛋白的氨基酸序列的遗传进化关系 | 第63页 |
| ·ALV-J中国野毒株的变异趋势 | 第63页 |
| ·免疫选择压对gp85基因变异的影响 | 第63-65页 |
| 附图 | 第65-72页 |
| 3.讨论 | 第72-78页 |
| ·试验一讨论 | 第72-74页 |
| ·试验2讨论 | 第74-78页 |
| 结论 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 攻读硕士研究生期间的论文情况 | 第86页 |
