| 一、中文摘要 | 第1-10页 |
| 二、英文摘要 | 第10-12页 |
| 三、缩略语英汉对照表 | 第12-13页 |
| 四、引言 | 第13-24页 |
| 1．1 概述 | 第13页 |
| 1．2 IBDV的病原特性 | 第13-14页 |
| 1．3 流行病学 | 第14-16页 |
| 1．3．1 自然宿主 | 第14-15页 |
| 1．3．2 传播媒介 | 第15页 |
| 1．3．3 潜伏期和症状 | 第15-16页 |
| 1．3．4 发病率和死亡率 | 第16页 |
| 1．4 血清型 | 第16页 |
| 1．5 IBDV的抵抗力 | 第16-17页 |
| 1．6 致病机理 | 第17-18页 |
| 1．7 免疫抑制 | 第18页 |
| 1．8 VP2蛋白及其功能 | 第18-20页 |
| 1．9 IBDV的变异 | 第20-21页 |
| 1．10 诊断 | 第21页 |
| 1．11 预防与控制 | 第21-24页 |
| 五、研究内容 | 第24-57页 |
| 试验一 IBDV野毒株的分离鉴定 | 第24-28页 |
| 1 材料和方法 | 第24-25页 |
| 1．1 IBDV原始病料 | 第24页 |
| 1．2 IBDV琼脂免疫扩散试验(AGID)标准抗原及血清 | 第24页 |
| 1．3 SPF鸡胚和SPF鸡 | 第24页 |
| 1．4 免疫胶体金试纸膜 | 第24页 |
| 1．5 病毒的处理 | 第24页 |
| 1．6 病毒的分离 | 第24-25页 |
| 1．7 琼脂免疫扩散试验 | 第25页 |
| 1．7．1 琼脂板的制备 | 第25页 |
| 1．7．2 琼脂免疫扩散试验步骤 | 第25页 |
| 1．8 免疫胶体金试纸膜检测IBDV | 第25页 |
| 1．9 分离株致病性的测定 | 第25页 |
| 1．10 病理组织学观察 | 第25页 |
| 2 结果 | 第25-27页 |
| 2．1 发病鸡的临床症状及流行病学 | 第25-26页 |
| 2．2 病毒分离结果 | 第26页 |
| 2．3 琼脂扩散试验 | 第26页 |
| 2．4 免疫胶体金试纸膜检测结果 | 第26页 |
| 2．5 动物回归试验结果 | 第26页 |
| 2．6 组织病理学观察 | 第26-27页 |
| 3 讨论 | 第27-28页 |
| 实验二 IBDV SD0306 VP2基因高变区的克隆与序列分析 | 第28-42页 |
| 1 材料 | 第28-29页 |
| 1．1 病毒 | 第28页 |
| 1．2 菌种 | 第28页 |
| 1．3 试剂 | 第28页 |
| 1．4 溶液配制 | 第28-29页 |
| 1．4．1 DEPC-H_2O | 第28页 |
| 1．4．2 100mg/mL氨苄霉素 | 第28页 |
| 1．4．3 LB培养液(基) | 第28-29页 |
| 1．4．4 SOB培养基 | 第29页 |
| 1．4．5 SOC培养基 | 第29页 |
| 2 方法 | 第29-35页 |
| 2．1 野毒株原代毒核酸RNA的提取 | 第29-30页 |
| 2．2 VP2高变区的扩增 | 第30-31页 |
| 2．2．1 引物的设计与合成 | 第30页 |
| 2．2．2 RT-PCR | 第30页 |
| 2．2．3 Nested-PCR | 第30-31页 |
| 2．2．4 PCR扩增鉴定 | 第31页 |
| 2．3 PCR产物的回收 | 第31页 |
| 2．4 VP2高变区的克隆与鉴定 | 第31-33页 |
| 2．4．1 PCR产物与pMD18-T vector的连接 | 第32页 |
| 2．4．2 感受态细胞的制备——氯化钙法 | 第32-33页 |
| 2．4．3 连接产物的转化 | 第33页 |
| 2．5 重组质粒的提取与鉴定 | 第33-35页 |
| 2．5．1 SDS碱裂解法小量提取质粒 | 第33-35页 |
| 2．5．2 重组质粒的琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 第35页 |
| 2．5．3 重组质粒的双酶切鉴定 | 第35页 |
| 2．6 阳性质粒测序与序列分析 | 第35页 |
| 3 结果 | 第35-41页 |
| 3．1 RT-PCR结果 | 第35-36页 |
| 3．2 目的基因的克隆和测序 | 第36-41页 |
| 3．2．1 重组质粒的酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 3．2．2 序列分析 | 第37-41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| 试验三 IBDV SD0306在SPF鸡胚上的传代致弱 | 第42-51页 |
| 1 材料和方法 | 第42-43页 |
| 1．1 病毒 | 第42页 |
| 1．2 SPF鸡胚和SPF鸡 | 第42页 |
| 1．3 克隆与测序试剂及受体菌 | 第42页 |
| 1．4 IBDV SD0306在SPF在鸡胚上的传代 | 第42页 |
| 1．5 E11及E15 EID_(50)的测定 | 第42-43页 |
| 1．6 鸡胚毒回归SPF鸡试验 | 第43页 |
| 1．7 鸡胚毒VP2高变区的克隆与序列分析 | 第43页 |
| 2 结果 | 第43-49页 |
| 2．1 IBDV SD0306在SPF鸡胚上的增殖 | 第43页 |
| 2．2 E11、E15鸡胚的EID_(50) | 第43页 |
| 2．3 动物回归试验 | 第43-44页 |
| 2．4 IBDV SD0306鸡胚毒VP2基因高变区的序列分析结果 | 第44-49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 试验四 IBDV鸡胚毒免疫效果的研究 | 第51-57页 |
| 1 材料与方法 | 第51-52页 |
| 1．1 实验材料 | 第51页 |
| 1．2 实验分组 | 第51页 |
| 1．3 母源抗体水平和免疫后抗体效价的检测 | 第51页 |
| 1．4 计算免疫器官指数及观察病理组织切片 | 第51-52页 |
| 1．5 人工感染用毒株及攻毒途径 | 第52页 |
| 1．6 统计学分析 | 第52页 |
| 2 结果 | 第52-55页 |
| 2．1 母源抗体水平与免疫后的IBDV抗体效价 | 第52-53页 |
| 2．2 疫苗免疫后对免疫器官的影响 | 第53-54页 |
| 2．2．1 囊重比与囊指数 | 第53-54页 |
| 2．2．2 免疫器官的组织损伤 | 第54页 |
| 2．3 NDV抗体水平的检测结果 | 第54页 |
| 2．4 E15对攻毒的免疫保护作用 | 第54-55页 |
| 3 讨论 | 第55-57页 |
| 六、结论 | 第57-58页 |
| 七、参考文献 | 第58-69页 |
| 八、致谢 | 第69-70页 |
| 九、攻读学位期间发表论文情况 | 第70-71页 |
| 十、附图 | 第71-75页 |
