| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-18页 |
| ·概述 | 第8-12页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶 | 第8页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶的作用机理 | 第8-9页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶酶活测定方法 | 第9-10页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶的应用 | 第10-11页 |
| ·产谷氨酰胺转胺酶菌株的选育 | 第11页 |
| ·国内外研究进展 | 第11-12页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第12-15页 |
| ·大肠杆菌表达系统的种类 | 第13-14页 |
| ·目的蛋白的表达形式 | 第14页 |
| ·包涵体形成的原因 | 第14-15页 |
| ·减少包涵体形成的策略 | 第15页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统 | 第15-17页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统的特点 | 第15页 |
| ·枯草芽孢杆菌常用的载体 | 第15-16页 |
| ·外源蛋白在枯草芽孢杆菌中的分泌表达 | 第16-17页 |
| ·本论文的立题依据和研究内容 | 第17-18页 |
| ·立题依据 | 第17页 |
| ·研究内容 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-29页 |
| ·实验材料 | 第18-21页 |
| ·菌株与质粒 | 第18页 |
| ·试剂 | 第18-20页 |
| ·主要溶液 | 第20-21页 |
| ·培养基 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-29页 |
| ·枯草芽孢杆菌DB104染色体DNA的提取 | 第21页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第21-22页 |
| ·DNA纯度和浓度的测定 | 第22页 |
| ·大肠杆菌表达载体pET-tg的构建 | 第22-24页 |
| ·目的基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达 | 第24-25页 |
| ·重组质粒pWBTG的构建及转化枯草芽孢杆菌DB104 | 第25-26页 |
| ·目的基因在枯草芽孢杆菌DB104中的表达 | 第26页 |
| ·大肠杆菌BL21/pET-tg培养条件的优化 | 第26页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第26-27页 |
| ·酶活测定 | 第27-28页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶酶学性质 | 第28-29页 |
| 3 结果与讨论 | 第29-51页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第29-32页 |
| ·枯草芽孢杆菌DB104染色体DNA的提取 | 第29页 |
| ·染色体DNA纯度和浓度的测定 | 第29-30页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第30-32页 |
| ·重组质粒pET-tg的构建及转化大肠杆菌JM109 | 第32-38页 |
| ·pET-22b(+)质粒的特性 | 第32-33页 |
| ·重组质粒pET-tg的构建 | 第33页 |
| ·重组质粒pET-tg转化大肠杆菌JM109 | 第33-36页 |
| ·重组质粒pET-tg转化大肠杆菌BL21(DE3)及目的基因的表达 | 第36-38页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第38-43页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pWBTG的构建 | 第39-41页 |
| ·重组质粒pWBTG转化枯草芽孢杆菌DB104 | 第41-43页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶基因的表达 | 第43页 |
| ·大肠杆菌BL21/pET-tg培养条件的优化 | 第43-47页 |
| ·诱导温度对目的产物表达的影响 | 第43-44页 |
| ·诱导时机对目的产物表达的影响 | 第44-45页 |
| ·诱导时间对目的产物表达的影响 | 第45-46页 |
| ·IPTG浓度对表达的影响 | 第46-47页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶的纯化及酶学性质研究 | 第47-51页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶的纯化 | 第47-48页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶的酶学性质 | 第48-51页 |
| 4 结论 | 第51-52页 |
| 5 展望 | 第52-53页 |
| 6 参考文献 | 第53-59页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第59-60页 |
| 8 致谢 | 第60页 |
