| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-21页 |
| ·β-内酰胺类抗生素 | 第9-10页 |
| ·β-内酰胺酶 | 第10-11页 |
| ·β-内酰胺酶的定义及作用方式 | 第10页 |
| ·β-内酰胺酶的分类 | 第10-11页 |
| ·青霉素酶 | 第11-14页 |
| ·产生青霉素酶的微生物 | 第12页 |
| ·青霉素酶的理化性质 | 第12-13页 |
| ·青霉素酶活性中心结构及催化机制 | 第13-14页 |
| ·青霉素酶活测定方法 | 第14页 |
| ·青霉素酶的分子生物学 | 第14-16页 |
| ·青霉素酶的应用 | 第16-19页 |
| ·在处理青霉素超标牛乳中的应用 | 第16-17页 |
| ·在酶联免疫分析中的应用 | 第17-18页 |
| ·在生物传感器中的应用 | 第18页 |
| ·在前药研制中的应用 | 第18-19页 |
| ·本论文研究的意义及内容 | 第19-21页 |
| ·研究的意义 | 第19页 |
| ·研究内容 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-36页 |
| ·实验材料 | 第21-26页 |
| ·质粒与菌株 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·主要溶液 | 第23-25页 |
| ·培养基和抗生素 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-36页 |
| ·紫外分光光度法测定青霉素酶活力 | 第26页 |
| ·腊样芽孢杆菌ATCC10987总DNA的提取 | 第26-27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第27页 |
| ·质粒的小量提取 | 第27-28页 |
| ·转化实验 | 第28-29页 |
| ·目的基因扩增 | 第29页 |
| ·连接反应 | 第29页 |
| ·转化子鉴定实验 | 第29页 |
| ·基因克隆及测序 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构建 | 第30页 |
| ·青霉素酶基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白浓度测定 | 第31-32页 |
| ·青霉素酶的纯化 | 第32页 |
| ·青霉素酶的固定化 | 第32-33页 |
| ·碘量法测定固定化酶活力 | 第33页 |
| ·氧化纤维素醛基含量的测定 | 第33-34页 |
| ·微生物法测定青霉素含量 | 第34页 |
| ·固定化青霉素酶的酶学性质研究 | 第34-35页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达载体的构建 | 第35页 |
| ·青霉素酶基因在枯草芽孢杆菌的表达及发酵过程优化 | 第35-36页 |
| 3 结果与讨论 | 第36-63页 |
| ·青霉素酶基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达 | 第36-44页 |
| ·腊样芽孢杆菌染色体DNA的提取 | 第36页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第36页 |
| ·克隆质粒的构建及序列分析 | 第36-38页 |
| ·pET28-penp原核表达载体的构建与鉴定 | 第38-40页 |
| ·重组菌生长规律及质粒稳定性的研究 | 第40-41页 |
| ·外源基因的诱导表达及发酵条件的优化 | 第41-44页 |
| ·青霉素酶的固定化及去除牛奶中残留青霉素的研究 | 第44-52页 |
| ·青霉素酶的纯化 | 第44-45页 |
| ·固定化载体的选择及氧化条件的优化 | 第45-48页 |
| ·青霉素酶的固定化及固定化条件的优化 | 第48-50页 |
| ·固定化酶去除牛奶中残留的青霉素 | 第50-51页 |
| ·固定化酶的稳定性研究 | 第51-52页 |
| ·青霉素酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第52-63页 |
| ·pWB-penp原核表达载体的构建与鉴定 | 第52-53页 |
| ·酶切鉴定 | 第53页 |
| ·PCR鉴定 | 第53-54页 |
| ·重组菌B.subtilis/pWB-penp的表达及酶活力分析 | 第54页 |
| ·种龄的确定及重组菌质粒稳定性的研究 | 第54-55页 |
| ·培养基的优化 | 第55-60页 |
| ·培养条件的优化 | 第60-63页 |
| 4 结论 | 第63-64页 |
| 5 展望 | 第64-65页 |
| 6 参考文献 | 第65-71页 |
| 7 攻读硕士学位期间论文发表情况 | 第71-72页 |
| 8 致谢 | 第72页 |