| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-22页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸概况 | 第9页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸的结构 | 第9页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸的基本性质 | 第9页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸在体内的作用 | 第9-11页 |
| ·转甲基作用 | 第9-10页 |
| ·转氨丙基作用 | 第10页 |
| ·转硫作用 | 第10页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸的生物学作用 | 第10-11页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸的制备方法 | 第11-13页 |
| ·化学合成法 | 第11页 |
| ·酶促转化法 | 第11-12页 |
| ·微生物合成法 | 第12-13页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸生产的研究历史及现状 | 第13-16页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸稳定化研究 | 第13-14页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸稳定性盐的开发 | 第14-15页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸的提取、分离纯化及测定 | 第15页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸的应用 | 第15-16页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸合成酶简介 | 第16-19页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸合成酶的基本性质 | 第16页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸合成酶催化的化学反应 | 第16页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸合成酶的基本结构 | 第16-17页 |
| ·S-腺苷甲硫氨酸合成酶及其编码基因的概述 | 第17-19页 |
| ·SAM合成酶基因工程菌的构建和转化研究 | 第19-20页 |
| ·SAM合成酶基因工程菌的构建 | 第19-20页 |
| ·转化反应及产物抑制 | 第20页 |
| ·论文的立题背景及研究内容 | 第20-22页 |
| ·立题背景 | 第20-21页 |
| ·研究内容 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-39页 |
| ·材料 | 第22-27页 |
| ·质粒及菌株 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·工具酶及标准蛋白 | 第23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23-24页 |
| ·相关溶液 | 第24-26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-39页 |
| ·菌体培养及保藏 | 第27-28页 |
| ·摇瓶发酵 | 第28页 |
| ·酿酒酵母基因组ONA的提取方法 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌中质粒的提取 | 第29页 |
| ·质粒DNA对大肠杆菌的转化 | 第29-30页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第30-31页 |
| ·DNA片段的回收 | 第31-32页 |
| ·DNA连接 | 第32页 |
| ·基因测序 | 第32页 |
| ·酿酒酵母醋酸锂转化 | 第32-33页 |
| ·酿酒酵母电转化方法 | 第33-34页 |
| ·酿酒酵母菌落PCR方法 | 第34页 |
| ·酿酒酵母DNA的快速分离 | 第34-35页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第35页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的稳定性分析 | 第36-37页 |
| ·SAM含量的测定-高效液相色谱法 | 第37页 |
| ·SAM合成酶活力的测定 | 第37-38页 |
| ·细胞干重的测定 | 第38-39页 |
| 3 结果与讨论 | 第39-64页 |
| ·SAM合成酶基因(sam2)的克隆 | 第39-41页 |
| ·酿酒酵母基因组DNA的提取 | 第39页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第39-41页 |
| ·重组质粒pUC19-sam2的构建及转化 | 第41-47页 |
| ·pUC19质粒图谱 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pUC19-sam2的构建 | 第42页 |
| ·克隆与转化 | 第42-44页 |
| ·阳性转化子的检出与鉴定 | 第44-47页 |
| ·表达载体pACT2-sam2的构建及转化 | 第47-53页 |
| ·表达载体pACT2的特性 | 第47-48页 |
| ·表达载体pACT2-sam2的构建 | 第48-49页 |
| ·重组表达载体pACT2-sam2转化酿酒酵母YS58 | 第49页 |
| ·阳性转化子的检出与鉴定 | 第49-53页 |
| ·转化子SAM合成酶活力及胞内SAM含量的测定 | 第53-56页 |
| ·HPLC法 | 第53-54页 |
| ·转化子SAM合成酶活力及胞内SAM含量的测定 | 第54-55页 |
| ·验证外源SAMS2基因表达提高了重组菌SAMS活力 | 第55页 |
| ·重组质粒稳定性分析 | 第55-56页 |
| ·工程菌YS58-5发酵条件优化 | 第56-64页 |
| ·发酵培养基的优化 | 第56-59页 |
| ·摇瓶发酵条件的优化 | 第59-62页 |
| ·最适条件下的发酵过程曲线 | 第62-64页 |
| 4 结论 | 第64-65页 |
| 5 展望 | 第65-66页 |
| 6 参考文献 | 第66-72页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第72-73页 |
| 8 致谢 | 第73页 |