| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| ·蛋白质修饰的研究进展 | 第10-12页 |
| ·蛋白质泛素化的研究进展 | 第12-13页 |
| ·蛋白质类泛素化途径的研究进展 | 第13页 |
| ·SUMO 化途径的研究进展 | 第13-20页 |
| ·SUMO 家族概述 | 第13-14页 |
| ·SUMO 化修饰和去SUMO 化修饰 | 第14-16页 |
| ·SUMO 蛋白的功能 | 第16-18页 |
| ·SUMO 第一类家族的研究进展 | 第18-20页 |
| ·抗体制备的研究概况 | 第20-21页 |
| ·本研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 人SUMO-1 蛋白原核表达载体的构建、表达及纯化 | 第22-39页 |
| ·材料 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-24页 |
| ·原核表达载体构建方面 | 第22-23页 |
| ·蛋白表达和纯化方面 | 第23-24页 |
| ·仪器 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-31页 |
| ·引物的设计和SUMO-1 片段的扩增 | 第24-25页 |
| ·凝胶中回收质粒pcDNA3-HA-SUMO1 的PCR 产物 | 第25-26页 |
| ·酶切质粒pcDNA3-HA-SUMO1 的PCR 回收产物 | 第26页 |
| ·酶切载体质粒pET-41a | 第26页 |
| ·溶液中回收酶切产物 | 第26-27页 |
| ·酶切后PCR 产物与pET-41a 载体连接 | 第27页 |
| ·Inoue 法制备超级感受态细胞（DH5α） | 第27页 |
| ·转化 | 第27页 |
| ·抽提重组质粒pET41a-SUM01（pET-S1） | 第27-28页 |
| ·重组质粒pET41a-SUM01 酶切鉴定 | 第28页 |
| ·重组质粒pET41a-SUM01-SUM01（pET-SS1）的构建 | 第28页 |
| ·目的基因的原核表达 | 第28-29页 |
| ·菌体总蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第29页 |
| ·菌体总蛋白的Western blotting 分析 | 第29-30页 |
| ·表达产物可溶性鉴定 | 第30页 |
| ·融合蛋白的大量制备及纯化 | 第30-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-35页 |
| ·pET-S1、pET-SS1 原核表达载体的构建与鉴定 | 第31-32页 |
| ·不同温度下IPTG 诱导重组质粒pET-SS1 和pET-S1 | 第32-33页 |
| ·不同IPTG 浓度下诱导重组质粒pET-SS1 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白GST-S1 和SUMO-1 蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| ·关于SUMO-1 蛋白的PCR 扩增和载体选择方面 | 第35-36页 |
| ·目的蛋白诱导表达及纯化方面 | 第36-37页 |
| ·结论 | 第37-39页 |
| 第三章 人SUMO-1 蛋白多克隆抗体制备及鉴定 | 第39-48页 |
| ·主要材料及试剂 | 第39-40页 |
| ·主要仪器 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-41页 |
| ·兔抗人SUMO-1 多克隆抗体的制备 | 第40页 |
| ·ELISA 方法检测抗体的效价 | 第40-41页 |
| ·抗血清的纯化 | 第41页 |
| ·多克隆抗体鉴定 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-44页 |
| ·Western Blotting 方法检测多克隆抗体 | 第41-42页 |
| ·ELISA 法检测抗体的效价及比较 | 第42-43页 |
| ·Hela 细胞内源性SUMO-1 蛋白Western blot 检测 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| ·关于提高抗血清效价的方法 | 第44-46页 |
| ·关于Western blot 的检测的讨论 | 第46页 |
| ·关于ELISA 实验 | 第46页 |
| ·结论 | 第46-48页 |
| 第四章 人SUMO-1 蛋白真核表达载体的构建、亚细胞结构的定位 | 第48-57页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第48-49页 |
| ·真核表达载体构建方面 | 第48页 |
| ·亚细胞结构定位方面 | 第48-49页 |
| ·方法 | 第49-51页 |
| ·真核表达载体pCMV-HA-SUM01(HA-S1)和pCMV-Myc-SUM01(Myc-S1)的构建 | 第49页 |
| ·真核表达载体pEGFP-C1-SUM01(GFP-S1)和pDsRed-C1-SUM01(Red-S1)的构建 | 第49页 |
| ·Hela 细胞的传代培养 | 第49-50页 |
| ·Hela 细胞的脂质体瞬时转染（24 孔板/6 孔板） | 第50页 |
| ·真核表达载体Myc-S1、GFP-S1 和Red-S1 的表达 | 第50-51页 |
| ·SUMO-1 蛋白的亚细胞结构定位 | 第51页 |
| ·SUMO-1 蛋白和PML 蛋白相互作用 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-55页 |
| ·真核表达载体HA-S1 和Myc-S1 构建示意图 | 第51页 |
| ·真核表达载体HA-S1 和Myc-S1 的构建及鉴定 | 第51-52页 |
| ·真核表达载体GFP-S1 和Red-S1 构建示意图 | 第52-53页 |
| ·真核表达载体GFP-S1 和Red-S1 的构建及酶切鉴定 | 第53页 |
| ·真核表达载体Myc-S1 在Hela 细胞中的表达检测 | 第53-54页 |
| ·SUMO-1 蛋白在Hela 细胞中的亚细胞结构定位 | 第54页 |
| ·SUMO-1 蛋白和PML 蛋白相互作用 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55页 |
| ·结论 | 第55-57页 |
| 总结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 附图 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简历 | 第68页 |
