| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 縮略语 | 第12-16页 |
| 第1章 研究背景 | 第16-36页 |
| ·蛋白质乙酰化修饰的生物学意义 | 第16-18页 |
| ·蛋白质乙酰化修饰的概念 | 第16-17页 |
| ·组蛋白的乙酰化/去乙酰化调节 | 第17页 |
| ·非组蛋白的乙酰化/去乙酰化调节 | 第17-18页 |
| ·ARD1的生物学功能及其与肿瘤的关系 | 第18-27页 |
| ·ARD1基因及其编码蛋白的研究概况 | 第19-21页 |
| ·酵母中的鉴定和功能 | 第19页 |
| ·人和小鼠中ARD1基因及其异构体的鉴定和功能 | 第19-21页 |
| ·ARD1与肿瘤的关系 | 第21-26页 |
| ·癌基因角色 | 第21-24页 |
| ·抑癌基因角色 | 第24-25页 |
| ·与代谢的关系 | 第25-26页 |
| ·ARD1的其他功能 | 第26-27页 |
| ·雄激素-AR信号转导与前列腺癌的关系 | 第27-33页 |
| ·雄激素在前列腺癌中的作用 | 第27-29页 |
| ·AR活-性调控与前列腺癌的关系 | 第29-33页 |
| ·AR分子结构基础和功能 | 第29-31页 |
| ·共调节因子对AR转录活性的影响 | 第31-32页 |
| ·AR乙酰化修饰与前列腺癌的关系 | 第32-33页 |
| ·AR的其他修饰与前列腺癌的关系 | 第33页 |
| ·ARD1与前列腺癌发生的关系 | 第33-36页 |
| 第2章 前列腺癌中ARD1的蛋白水平与雄激素受体信号转导的关系 | 第36-58页 |
| ·引言 | 第36页 |
| ·材料与方法 | 第36-48页 |
| ·实验材料 | 第36-40页 |
| ·细胞株 | 第36页 |
| ·前列腺癌组织及癌旁组织 | 第36-37页 |
| ·菌株和质粒 | 第37页 |
| ·培养基和血清 | 第37-38页 |
| ·PCR引物合成和测序 | 第38页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-48页 |
| ·前列腺正常细胞和癌细胞株的培养 | 第40页 |
| ·前列腺癌及癌旁组织总蛋白的提取 | 第40页 |
| ·免疫组织化学染色 | 第40-42页 |
| ·ARD1-Luc报告基因的克隆 | 第42-43页 |
| ·E.coli DH5α感受态菌制备和质粒转化 | 第43-44页 |
| ·雄激素R1881或DHT对细胞的诱导 | 第44-45页 |
| ·siRNA和质粒的转染 | 第45页 |
| ·ARD1报告基因活性测试 | 第45页 |
| ·细胞裂解液的处理 | 第45页 |
| ·SDS-PAGE和Western blotting | 第45-46页 |
| ·总RNA提取、cDNA合成及qRT-PCR | 第46-47页 |
| ·双荧光素酶报告基因活性检测 | 第47-48页 |
| ·统计学分析 | 第48页 |
| ·结果 | 第48-56页 |
| ·ARD1在前列腺癌细胞系和癌组织中高表达 | 第48-52页 |
| ·ARD1蛋白在前列腺正常细胞和癌细胞系中的表达 | 第48-49页 |
| ·ARD1蛋白在前列腺癌组织及配对癌旁组织中的表达 | 第49-50页 |
| ·免疫组织化学分析ARD1在前列腺正常组织和癌组织中的表达 | 第50-52页 |
| ·雄激素-AR信号转导对ARD1蛋白的诱导作用 | 第52-56页 |
| ·雄激素-AR信号转导不影响ARD1mRNA的转录水平 | 第52-53页 |
| ·ARD1蛋白水平在AR依赖型和AR非依赖型细胞株中的诱导 | 第53-54页 |
| ·雄激素剂量和时间对ARD1蛋白水平诱导的影响 | 第54-55页 |
| ·siRNA沉默AR对ARD1蛋白水平诱导的影响 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-58页 |
| 第3章 ARD1促进前列腺癌细胞的生长、增殖和致瘤性 | 第58-70页 |
| ·引言 | 第58页 |
| ·材料与方法 | 第58-64页 |
| ·实验材料 | 第58-59页 |
| ·实验动物和细胞株 | 第58页 |
| ·菌株和质粒 | 第58页 |
| ·培养基和血清 | 第58-59页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第59页 |
| ·实验方法 | 第59-64页 |
| ·构建对照shRNA -pLKO.1和ARD1 shRNA -pLKO.1慢病毒表达载体 | 第59-62页 |
| ·制备shControl和shARD1慢病毒 | 第62页 |
| ·慢病毒转导LNCaP细胞 | 第62页 |
| ·稳定表达shControl和shARD1细胞株的筛选和鉴定 | 第62-63页 |
| ·细胞生长和增殖测试 | 第63页 |
| ·非贴壁性软琼脂克隆形成实验 | 第63页 |
| ·LNCaP细胞移植瘤的生长实验 | 第63-64页 |
| ·SDS-PAGE和Western blotting分析 | 第64页 |
| ·统计分析 | 第64页 |
| ·结果 | 第64-68页 |
| ·shControl和shARD1慢病毒表达载体的构建和鉴定 | 第64页 |
| ·建立稳定表达shControl和shARD1的LNCaP细胞株 | 第64-65页 |
| ·沉默ARD1抑制LNCaP细胞的生长和增殖 | 第65-67页 |
| ·沉默ARD1抑制LNCaP细胞的非贴壁性软琼脂克隆形成 | 第67页 |
| ·沉默ARD1抑制LNCaP细胞移植瘤的生长 | 第67-68页 |
| ·小结 | 第68-70页 |
| 第4章 ARD1对AR转录活性的调节作用 | 第70-88页 |
| ·引言 | 第70页 |
| ·材料和方法 | 第70-76页 |
| ·实验材料 | 第70-71页 |
| ·细胞株 | 第70页 |
| ·菌株和质粒 | 第70-71页 |
| ·培养基和血清 | 第71页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第71页 |
| ·实验方法 | 第71-76页 |
| ·构建哺乳动物细胞表达质粒Flag-ARD1-pCMV | 第71-74页 |
| ·293T细胞中外源性表达的ARD1和AR间的相互作用 | 第74-75页 |
| ·前列腺癌细胞LNCaP内源性表达ARD1和AR间的相互作用 | 第75页 |
| ·染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第75-76页 |
| ·In Vitro乙酰化作用检测 | 第76页 |
| ·结果 | 第76-87页 |
| ·哺乳动物细胞表达载体Flag-ARD1-pCMV的构建和鉴定 | 第76-77页 |
| ·ARD1上调控AR的转录活性 | 第77-82页 |
| ·双荧光素酶法分析ARD1对报告基因PSA和MMTV活性的调节 | 第77-78页 |
| ·qRT-PCR法分析沉默ARD1基因对AR靶基因转录水平的调节 | 第78-79页 |
| ·ARD1依赖于AR调节PSA-Luc报告基因的活性 | 第79-80页 |
| ·ARD1依赖于AR调节AR靶基因的转录 | 第80-82页 |
| ·外源或内源ARD1/AR间的相互作用 | 第82-84页 |
| ·外源ARD1/AR间的相互作用 | 第82-83页 |
| ·内源ARD1/AR间的相互作用 | 第83-84页 |
| ·ARD1介导AR的乙酰化修饰 | 第84-86页 |
| ·ARD1调节AR的乙酰化水平 | 第84页 |
| ·ARD1介导AR的乙酰化修饰不依赖于p300 | 第84-86页 |
| ·AR的转录活性激活依赖于ARD1介导的乙酰化修饰 | 第86-87页 |
| ·小结 | 第87-88页 |
| 第5章 讨论和总结 | 第88-94页 |
| ·讨论 | 第88-92页 |
| ·ARD1与肿瘤发生的关系 | 第89-90页 |
| ·雄激素-AR信号转导对ARD1的上调作用 | 第90-91页 |
| ·ARD1对AR转录活性激活的调节方式 | 第91-92页 |
| ·ARD1与AR阴性的前列腺癌的关系 | 第92页 |
| ·总结 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-100页 |
| 附录1：常见溶液的配制方法 | 第100-102页 |
| 附录2：qRT-PCR和克隆引物序列 | 第102-104页 |
| 附录3：DNA测序报告 | 第104-115页 |
| 附录4：博士研究生期间论文发表和项目参与情况 | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
