| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-19页 |
| ·微生物制造及其发展概况 | 第10-12页 |
| ·微生物制造是现代经济发展的必然趋势 | 第10页 |
| ·微生物制造所涉及的关键微生物技术 | 第10-11页 |
| ·精细化学品的微生物制造 | 第11-12页 |
| ·α-酮戊二酸研究背景 | 第12-15页 |
| ·α-酮戊二酸的结构和应用 | 第12-13页 |
| ·发酵法生产α-酮戊二酸的历史 | 第13-14页 |
| ·α-酮戊二酸的生物合成途径 | 第14-15页 |
| ·α-酮酸脱氢酶系 | 第15-16页 |
| ·α-酮酸脱氢酶系的作用 | 第15-16页 |
| ·α-酮酸脱氢酶系的组成和研究近况 | 第16页 |
| ·本论文的立题依据和意义 | 第16-17页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第17-18页 |
| ·本论文中所用到的符号说明 | 第18-19页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第19-27页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·菌种和质粒 | 第19页 |
| ·酶和试剂 | 第19页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·发酵及分析方法 | 第20-21页 |
| ·发酵培养方法 | 第20页 |
| ·有机酸的测定 | 第20页 |
| ·胞内核苷酸类物质的提取和测定 | 第20-21页 |
| ·胞内氨基酸的提取和测定 | 第21页 |
| ·粗酶液的提取和酶活测定 | 第21页 |
| ·其他参数测定 | 第21页 |
| ·基因操作方法 | 第21-27页 |
| ·DNA 基本操作 | 第21-22页 |
| ·目的基因kgd1 的克隆与表达 | 第22-23页 |
| ·敲除质粒pMD-kgd1::kan 的构建 | 第23-25页 |
| ·T. glabrata 敲除kgd1 基因工程菌的构建 | 第25页 |
| ·目的基因pda1 的扩增 | 第25页 |
| ·表达质粒pYX-PDA1 的构建 | 第25-26页 |
| ·T. glabrata 过量表达pda1 基因工程菌的构建 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-46页 |
| ·抑制 α-KGDH 活性 促进 α-酮戊二酸过量积累 | 第27-33页 |
| ·α-KGDH 抑制剂的选择 | 第28-29页 |
| ·同时添加过氧化氢和甲氨喋呤促进T. glabrata 发酵产酸 | 第29-30页 |
| ·前疏后阻促进T. glabrata 发酵生产α-酮戊二酸 | 第30-32页 |
| ·小结 | 第32-33页 |
| ·敲除 α-KGDH-E1 基因 kgd1 对细胞代谢及产酸的影响 | 第33-40页 |
| ·目的基因的扩增与敲除质粒的构建 | 第33-34页 |
| ·重组菌的构建与鉴定 | 第34-35页 |
| ·α-KGDH 对胞内核苷类物质及TCA 循环关键酶活性的影响 | 第35-36页 |
| ·α-KGDH 对碳流量及流向与氨基酸代谢的影响 | 第36-37页 |
| ·敲除kgd1 对T. glabrata 发酵生产α-酮戊二酸的影响 | 第37-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| ·过量表达 pda1 提高 PDH 途径通量促进 α-酮戊二酸积累 | 第40-44页 |
| ·目的基因的扩增与表达质粒的构建 | 第40-41页 |
| ·过量表达pda1 重组菌的构建 | 第41页 |
| ·重组菌的质粒提取和菌落PCR 验证 | 第41-42页 |
| ·提高PDH 活性对T. glabrata 发酵生产α-酮戊二酸的影响 | 第42-44页 |
| ·小结 | 第44页 |
| ·本章总结 | 第44-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录： 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第51页 |
