| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-28页 |
| ·西尼罗热概述 | 第15-23页 |
| ·病原学 | 第15-16页 |
| ·基因组结构与特征 | 第16-17页 |
| ·基因组编码蛋白的生物学功能与特性 | 第17-19页 |
| ·WNV 的生态学与流行病学 | 第19-20页 |
| ·临床症状 | 第20页 |
| ·WNF 的预防 | 第20-21页 |
| ·WNF 的诊断 | 第21-23页 |
| ·黄病毒属病毒NS1 蛋白的研究进展 | 第23-25页 |
| ·NS1 蛋白的生物学功能 | 第24页 |
| ·NS1 蛋白在疫病防治与诊断中的应用 | 第24-25页 |
| ·WNV 抗原表位研究进展 | 第25-26页 |
| ·噬菌体展示技术的原理及其在B 细胞表位研究中的应用 | 第26页 |
| ·噬菌体展示技术的原理 | 第26页 |
| ·噬菌体展示技术在 B 细胞表位研究中的应用 | 第26页 |
| ·研究的目的与意义 | 第26-28页 |
| 第二章 西尼罗病毒 NS1 基因的原核表达与抗原性检测 | 第28-36页 |
| ·材料 | 第28-30页 |
| ·基因、菌株、质粒和血清 | 第28页 |
| ·酶和主要试剂 | 第28页 |
| ·主要溶液和培养基的配制 | 第28-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| ·引物 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-32页 |
| ·NS1 蛋白基因的扩增 | 第30页 |
| ·NS1 蛋白原核表达载体的构建 | 第30-31页 |
| ·NS1 基因的原核表达与SDS-PAGE 分析 | 第31页 |
| ·原核表达重组 NS1 蛋白的纯化 | 第31页 |
| ·原核表达重组 NS1 蛋白的抗原性鉴定 | 第31-32页 |
| ·结果 | 第32-35页 |
| ·NS1 基因的PCR 扩增 | 第32页 |
| ·重组质粒pc2X-NS1 的鉴定 | 第32-33页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 电泳分析 | 第33页 |
| ·表达产物的纯化 | 第33页 |
| ·表达产物的Western-blot 检测 | 第33-34页 |
| ·表达产物的间接 ELISA 检测 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 西尼罗病毒 NS1 基因的真核表达与抗原性检测 | 第36-45页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·基因、菌株、质粒、细胞和血清 | 第36页 |
| ·酶和主要试剂 | 第36页 |
| ·主要溶液和培养基的配制 | 第36-37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37页 |
| ·引物 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-40页 |
| ·NS1 蛋白基因的扩增 | 第37页 |
| ·NS1 基因重组杆状病毒转移载体的构建 | 第37-38页 |
| ·NS1 基因重组杆粒的的制备与鉴定 | 第38-39页 |
| ·NS1 基因重组杆状病毒的获得与扩增 | 第39页 |
| ·NS1 基因在Sf9 细胞中的表达与SDS-PAGE 分析 | 第39-40页 |
| ·真核表达重组 NS1 蛋白的纯化 | 第40页 |
| ·真核表达重组 NS1 蛋白的抗原性鉴定 | 第40页 |
| ·结果 | 第40-43页 |
| ·NS1 基因的PCR 扩增 | 第40-41页 |
| ·重组质粒pFast-NS1 的鉴定 | 第41页 |
| ·重组杆粒 BAC-NS1 的鉴定 | 第41页 |
| ·重组杆状病毒 BACV-NS1 的扩增 | 第41-42页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 电泳分析 | 第42页 |
| ·真核表达重组NS1 蛋白的纯化 | 第42-43页 |
| ·真核表达重组 NS1 蛋白的抗原性鉴定 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 西尼罗病毒 NS1 蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 | 第45-57页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·细胞与抗体 | 第45页 |
| ·主要试剂和药品 | 第45页 |
| ·主要溶液和培养液的配制 | 第45-46页 |
| ·实验动物 | 第46页 |
| ·主要仪器设备 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-52页 |
| ·动物免疫 | 第46-47页 |
| ·细胞融合 | 第47-48页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第48-49页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化、冻存和复苏 | 第49页 |
| ·单克隆抗体腹水的制备 | 第49-50页 |
| ·杂交瘤细胞及单克隆抗体特性的鉴定 | 第50-52页 |
| ·结果 | 第52-56页 |
| ·间接 ELISA 检测方法的建立 | 第52页 |
| ·杂交瘤细胞株的获得 | 第52-53页 |
| ·单克隆抗体亚类的鉴定 | 第53页 |
| ·单克隆抗体特异性鉴定 | 第53-55页 |
| ·腹水中单克隆抗体效价以及杂交瘤细胞株抗体分泌稳定性的测定 | 第55页 |
| ·腹水中单克隆抗体的纯化以及浓度测定 | 第55页 |
| ·单克隆抗体相对亲和力的测定 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| 第五章 西尼罗病毒 NS1 蛋白 B 细胞表位鉴定 | 第57-69页 |
| ·材料 | 第57页 |
| ·肽库、菌株、质粒与NS1 蛋白单克隆抗体 | 第57页 |
| ·酶和主要试剂 | 第57页 |
| ·方法 | 第57-60页 |
| ·噬菌体展示随机肽库的生物淘选 | 第57页 |
| ·噬菌体基因组 DNA 的提取与序列测定 | 第57-58页 |
| ·B 细胞表位的初步鉴定与精确定位 | 第58-60页 |
| ·NS1 蛋白B 细胞表位的保守型和病毒特异性分析 | 第60页 |
| ·结果 | 第60-67页 |
| ·淘选产率 | 第60页 |
| ·噬菌体测序结果及与 NS1 蛋白相似性比较 | 第60-61页 |
| ·B 细胞表位的初步鉴定 | 第61-64页 |
| ·B 细胞表位的精确定位 | 第64-67页 |
| ·NS1 蛋白 B 细胞表位的保守性和病毒特异性分析 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| 第六章 全文结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 作者简历 | 第81页 |
