摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-11页 |
英文缩略表 | 第11-12页 |
第一章 绪论 | 第12-20页 |
·禽流感概述 | 第12页 |
·禽流感病毒的基因组成 | 第12-13页 |
·流感病毒的 RNA 聚合酶结构与功能 | 第13-15页 |
·流感病毒 RNA 聚合酶亚基 | 第13-14页 |
·流感病毒聚合酶各个亚基间的结合及组装方式 | 第14页 |
·流感病毒 RNA 聚合酶与病毒基因的结合 | 第14-15页 |
·宿主细胞因子对流感病毒 RNA 聚合酶功能调控 | 第15-18页 |
·串联亲和纯化方法 | 第18页 |
·研究的目的和意义 | 第18-20页 |
第二章 针对流感病毒聚合酶 PB2 蛋白单抗的制备及初步应用 | 第20-32页 |
·材料和方法 | 第20-21页 |
·实验材料 | 第20-21页 |
·实验方法 | 第21-26页 |
·免疫小鼠 | 第21-22页 |
·饲养细胞的制备 | 第22页 |
·小鼠骨髓瘤细胞的准备 | 第22页 |
·细胞融合 | 第22-23页 |
·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第23页 |
·单克隆抗体的鉴定 | 第23-24页 |
·间接免疫荧光方法检验对病毒蛋白的反应性 | 第23页 |
·western blotting 方法检验对病毒蛋白的反应性 | 第23-24页 |
·单克隆抗体亚型鉴定 | 第24页 |
·杂交瘤细胞染色体数目分析 | 第24页 |
·单抗大量制备及纯化 | 第24-25页 |
·单抗腹水的制备 | 第24-25页 |
·单抗的纯化及浓度测定 | 第25页 |
·免疫共沉淀方法得到流感病毒聚合酶复合体 | 第25-26页 |
·病毒扩增及毒价滴定 | 第25-26页 |
·免疫共沉淀 | 第26页 |
·结果 | 第26-30页 |
·杂交瘤细胞筛选结果 | 第26-27页 |
·单抗对病毒蛋白的反应性 | 第27-28页 |
·抗体亚类鉴定及杂交瘤细胞染色体数目分析 | 第28页 |
·抗体纯化及浓度测定 | 第28-29页 |
·尿囊液病毒滴定 | 第29页 |
·免疫共沉淀方法得到 DKZJ/11/00 病毒株的流感病毒聚合酶复合体 | 第29-30页 |
·讨论 | 第30-32页 |
·小鼠免疫效果 | 第30页 |
·杂交瘤细胞株的建立 | 第30-31页 |
·免疫共沉淀 | 第31-32页 |
第三章 流感病毒聚合酶复合体的串联亲和纯化 | 第32-40页 |
·材料与方法 | 第32-35页 |
·毒株及细胞系 | 第32页 |
·质粒及主要试剂 | 第32页 |
·主要试剂配制 | 第32页 |
·试验所用引物序列 | 第32页 |
·提取 DKGX/35/01 毒株病毒核酸 | 第32-33页 |
·反转录 PCR 得到流感病毒聚合酶编码片段 | 第33页 |
·重组质粒的构建及鉴定 | 第33-34页 |
·转染质粒的大量制备 | 第34页 |
·质粒转染 | 第34页 |
·免疫荧光检验细胞内表达的聚合酶亚基蛋白 | 第34-35页 |
·TAP 方法纯化聚合酶复合体 | 第35页 |
·结果 | 第35-37页 |
·重组质粒的酶切鉴定 | 第35-36页 |
·转染质粒的间接免疫荧光鉴定 | 第36页 |
·TAP 纯化产物的 SDS-PAGE 电泳及 Western-blotting 鉴定 | 第36-37页 |
·讨论 | 第37-40页 |
·病毒核酸的提取 | 第37-38页 |
·串联亲和纯化中质粒的设计 | 第38页 |
·无菌方法大量制备质粒 | 第38页 |
·细胞转染 | 第38页 |
·间接免疫荧光 | 第38-39页 |
·TAP 纯化 | 第39-40页 |
第四章 与流感病毒 RNA 聚合酶作用的宿主因子的初步研究 | 第40-46页 |
·材料与方法 | 第40-42页 |
·主要材料 | 第40页 |
·仪器 | 第40页 |
·溶液配制 | 第40页 |
·亲和层析方法制备流感病毒聚合酶与宿主因子复合物 | 第40-41页 |
·二维电泳样品处理 | 第41页 |
·蛋白定量 | 第41页 |
·等电聚焦电泳 | 第41-42页 |
·胶条平衡 | 第42页 |
·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第42页 |
·显色及结果分析 | 第42页 |
·结果 | 第42-44页 |
·亲和层析 | 第42-43页 |
·2-D 电泳中的蛋白定量 | 第43页 |
·2-D 电泳结果 | 第43-44页 |
·讨论 | 第44-46页 |
·亲和层析 | 第44页 |
·二维电泳 | 第44-46页 |
第五章 全文结论 | 第46-47页 |
参考文献 | 第47-52页 |
致谢 | 第52-53页 |
作者简介 | 第53页 |