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禽流感病毒RNA聚合酶真核表达纯化及与其结合宿主因子的初步研究

摘要第1-7页
Abstract第7-11页
英文缩略表第11-12页
第一章 绪论第12-20页
   ·禽流感概述第12页
   ·禽流感病毒的基因组成第12-13页
   ·流感病毒的 RNA 聚合酶结构与功能第13-15页
     ·流感病毒 RNA 聚合酶亚基第13-14页
     ·流感病毒聚合酶各个亚基间的结合及组装方式第14页
     ·流感病毒 RNA 聚合酶与病毒基因的结合第14-15页
   ·宿主细胞因子对流感病毒 RNA 聚合酶功能调控第15-18页
   ·串联亲和纯化方法第18页
   ·研究的目的和意义第18-20页
第二章 针对流感病毒聚合酶 PB2 蛋白单抗的制备及初步应用第20-32页
   ·材料和方法第20-21页
     ·实验材料第20-21页
   ·实验方法第21-26页
     ·免疫小鼠第21-22页
     ·饲养细胞的制备第22页
     ·小鼠骨髓瘤细胞的准备第22页
     ·细胞融合第22-23页
     ·阳性杂交瘤细胞的筛选第23页
     ·单克隆抗体的鉴定第23-24页
       ·间接免疫荧光方法检验对病毒蛋白的反应性第23页
       ·western blotting 方法检验对病毒蛋白的反应性第23-24页
       ·单克隆抗体亚型鉴定第24页
       ·杂交瘤细胞染色体数目分析第24页
     ·单抗大量制备及纯化第24-25页
       ·单抗腹水的制备第24-25页
       ·单抗的纯化及浓度测定第25页
     ·免疫共沉淀方法得到流感病毒聚合酶复合体第25-26页
       ·病毒扩增及毒价滴定第25-26页
       ·免疫共沉淀第26页
   ·结果第26-30页
     ·杂交瘤细胞筛选结果第26-27页
     ·单抗对病毒蛋白的反应性第27-28页
     ·抗体亚类鉴定及杂交瘤细胞染色体数目分析第28页
     ·抗体纯化及浓度测定第28-29页
     ·尿囊液病毒滴定第29页
     ·免疫共沉淀方法得到 DKZJ/11/00 病毒株的流感病毒聚合酶复合体第29-30页
   ·讨论第30-32页
     ·小鼠免疫效果第30页
     ·杂交瘤细胞株的建立第30-31页
     ·免疫共沉淀第31-32页
第三章 流感病毒聚合酶复合体的串联亲和纯化第32-40页
   ·材料与方法第32-35页
     ·毒株及细胞系第32页
     ·质粒及主要试剂第32页
     ·主要试剂配制第32页
     ·试验所用引物序列第32页
     ·提取 DKGX/35/01 毒株病毒核酸第32-33页
     ·反转录 PCR 得到流感病毒聚合酶编码片段第33页
     ·重组质粒的构建及鉴定第33-34页
     ·转染质粒的大量制备第34页
     ·质粒转染第34页
     ·免疫荧光检验细胞内表达的聚合酶亚基蛋白第34-35页
     ·TAP 方法纯化聚合酶复合体第35页
   ·结果第35-37页
     ·重组质粒的酶切鉴定第35-36页
     ·转染质粒的间接免疫荧光鉴定第36页
     ·TAP 纯化产物的 SDS-PAGE 电泳及 Western-blotting 鉴定第36-37页
   ·讨论第37-40页
     ·病毒核酸的提取第37-38页
     ·串联亲和纯化中质粒的设计第38页
     ·无菌方法大量制备质粒第38页
     ·细胞转染第38页
     ·间接免疫荧光第38-39页
     ·TAP 纯化第39-40页
第四章 与流感病毒 RNA 聚合酶作用的宿主因子的初步研究第40-46页
   ·材料与方法第40-42页
     ·主要材料第40页
     ·仪器第40页
     ·溶液配制第40页
     ·亲和层析方法制备流感病毒聚合酶与宿主因子复合物第40-41页
     ·二维电泳样品处理第41页
     ·蛋白定量第41页
     ·等电聚焦电泳第41-42页
     ·胶条平衡第42页
     ·聚丙烯酰胺凝胶电泳第42页
     ·显色及结果分析第42页
   ·结果第42-44页
     ·亲和层析第42-43页
     ·2-D 电泳中的蛋白定量第43页
     ·2-D 电泳结果第43-44页
   ·讨论第44-46页
     ·亲和层析第44页
     ·二维电泳第44-46页
第五章 全文结论第46-47页
参考文献第47-52页
致谢第52-53页
作者简介第53页

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