| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 Trypanosoma brucei中SUMO蛋白的NMR结构研究 | 第12-66页 |
| ·ubiquitin和ubiquitin-like蛋白家族 | 第12页 |
| ·SUMO蛋白 | 第12-19页 |
| ·SUMO化机制 | 第13-14页 |
| ·E1激活酶(E1-activating enzyme) | 第14页 |
| ·E2结合酶(E2-conjugating enzyme) | 第14-15页 |
| ·E3连接酶(E3 ligase) | 第15-17页 |
| ·SUMO的加工和去连接 | 第17-18页 |
| ·SUMO结合位点 | 第18-19页 |
| ·SUMO蛋白在细胞中的功能 | 第19-28页 |
| ·SUMO化(SUMOylation)对底物蛋白的空间构象的影响 | 第19-20页 |
| ·SUMO底物蛋白及其功能 | 第20-21页 |
| ·SUMO和细胞转录 | 第21-23页 |
| ·SUMO与DNA损伤修复 | 第23-24页 |
| ·SUMO和细胞内蛋白定位 | 第24-25页 |
| ·SUMO与病毒蛋白 | 第25页 |
| ·SUMO和疾病 | 第25-28页 |
| ·布氏锥虫背景介绍 | 第28-31页 |
| ·实验方法和步骤 | 第31-37页 |
| ·生物信息学分析 | 第32页 |
| ·锥体虫基因组的提取和目的片段的扩增 | 第32-33页 |
| ·质粒的构建和检验 | 第33-35页 |
| ·目的蛋白的表达纯化 | 第35-37页 |
| ·目的蛋白的稳定性测定 | 第37页 |
| ·核磁共振波谱(NMR)解析锥体虫中SUMO蛋白的三维溶液结构 | 第37-45页 |
| ·~(15)N单标记和~(15)N,~(13)C双标记蛋白样品的制备 | 第37-38页 |
| ·人E2酶Ubc9的表达和纯化 | 第38-39页 |
| ·NMR实验和数据变换 | 第39-40页 |
| ·主链和侧链化学位移认证 | 第40-42页 |
| ·蛋白质二级结构的预测 | 第42-43页 |
| ·三维溶液结构计算 | 第43-44页 |
| ·化学位移扰动实验 | 第44-45页 |
| ·实验结果和讨论 | 第45-56页 |
| ·生物信息分析结果 | 第45页 |
| ·Tb-SUMO/pET22b(+)重组质粒的构建 | 第45页 |
| ·Tb-SUMO蛋白的表达和纯化 | 第45-48页 |
| ·NMR波谱解析锥体虫中SUMO蛋白质的三维溶液结构 | 第48-53页 |
| ·化学微扰实验 | 第53-56页 |
| ·总结 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 第二章 原核生物Mycobacterium tuberculosis中Pup蛋白的结构研究 | 第66-102页 |
| ·真核生物中ubiquitin介导的蛋白质降解 | 第66-67页 |
| ·蛋白酶体结构 | 第67-72页 |
| ·20S蛋白酶体亚基 | 第68-70页 |
| ·19S调节亚基 | 第70-72页 |
| ·原核细胞结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis)的Ubiquitin-LikeProtein | 第72-74页 |
| ·Mpa背景介绍 | 第74-76页 |
| ·实验方法和步骤 | 第76-79页 |
| ·Pup全基因的合成 | 第76页 |
| ·表达质粒的重组和构建 | 第76页 |
| ·蛋白质表达和纯化 | 第76页 |
| ·分子筛实验测定蛋白质的聚合状态研究(廖善晖同学完成) | 第76-77页 |
| ·圆二色谱实验(廖善晖同学完成) | 第77页 |
| ·SPR(surface plasmon resonance)测动力学参数实验及蛋白稳定性测试同SUMO(廖善晖完成) | 第77页 |
| ·~(15)N单标记蛋白样品的制备(廖善晖完成) | 第77-78页 |
| ·核磁数据收集 | 第78页 |
| ·Mpa与Pup相互结合研究 | 第78-79页 |
| ·实验结果和讨论 | 第79-96页 |
| ·蛋白序列分析 | 第79页 |
| ·Pup无规性质的理论研究 | 第79-81页 |
| ·Pup蛋白的表达纯化 | 第81页 |
| ·Pup蛋白圆二色谱实验 | 第81-82页 |
| ·核磁方法(NMR)分析Pup蛋白的无规性质 | 第82-85页 |
| ·Pup蛋白和Mpa蛋白相互结合的动力学研究(廖善晖完成) | 第85-86页 |
| ·Mpa与Pup蛋白的化学微扰实验 | 第86-87页 |
| ·Mpa-98的蛋白表达 | 第87-88页 |
| ·Mpa的NMR研究 | 第88-89页 |
| ·CD检测Mpa的二级结构 | 第89-90页 |
| ·不同PH下的Mpa-98的HSQC | 第90-92页 |
| ·Mpa-98与Pup的SPR研究 | 第92页 |
| ·Mpa-98与Pup结合的化学微扰实验 | 第92-93页 |
| ·Mpa-98蛋白质的尿素变性试验 | 第93-96页 |
| ·总结 | 第96-99页 |
| 参考文献 | 第99-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第103页 |
