| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-36页 |
| ·微生物几丁质酶 | 第15-22页 |
| ·几丁质 | 第15-16页 |
| ·几丁质酶 | 第16-17页 |
| ·微生物几丁质酶 | 第17-22页 |
| ·微生物几丁质酶分子生物学基础研究 | 第22-27页 |
| ·细菌几丁质酶基因 | 第22-23页 |
| ·微生物几丁质酶的结构 | 第23-27页 |
| ·苏云金芽孢杆菌几丁质酶研究概况 | 第27-33页 |
| ·产几丁质酶苏云金芽孢杆菌(Bt)的筛选方法 | 第27-28页 |
| ·Bt几丁质酶合成条件研究 | 第28页 |
| ·Bt几丁质酶基因种类 | 第28页 |
| ·Bt几丁质酶的结构域 | 第28-30页 |
| ·Bt几丁质酶理化性质研究 | 第30页 |
| ·Bt几丁质酶在生物防治中的应用潜力 | 第30-31页 |
| ·Bt几丁质酶基因的异源表达 | 第31-32页 |
| ·Bt几丁质酶的表达调控 | 第32-33页 |
| ·研究内容、目的及意义 | 第33-36页 |
| ·研究目的及意义 | 第33-34页 |
| ·研究内容 | 第34-36页 |
| 第二章 异源表达的苏云金芽孢杆菌几丁质酶ChiA、ChiB性质与应用潜能评价 | 第36-52页 |
| ·实验材料 | 第36-39页 |
| ·菌株、供试昆虫 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36-37页 |
| ·PCR及克隆所用试剂 | 第37页 |
| ·酶活检测所用试剂 | 第37页 |
| ·蛋白纯化 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE及酶谱分析所用试剂 | 第37-38页 |
| ·生测用试剂 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-42页 |
| ·胶体几丁质的制备 | 第39-40页 |
| ·苏云金芽孢杆菌几丁质酶粗酶的制备与纯化 | 第40页 |
| ·几丁质酶的纯化 | 第40页 |
| ·蛋白浓度与几丁质酶酶活测定 | 第40-41页 |
| ·SDS-PAGE与酶谱分析 | 第41页 |
| ·金属离子及效应物对几丁质酶活力的影响 | 第41页 |
| ·最佳pH、温度及pH与温度稳定性测定 | 第41-42页 |
| ·杯碟法检测抑真菌活性及半抑制浓度的确定 | 第42页 |
| ·几丁质酶对苏云金芽孢杆菌杀虫毒力的增效作用 | 第42页 |
| ·结果与分析 | 第42-49页 |
| ·两种几丁质酶纯化与酶谱分析 | 第42-44页 |
| ·不同金属离子与EDTA、SDS对ChiA与ChiB酶活性的影响 | 第44-45页 |
| ·几丁质酶的最适pH与pH稳定性 | 第45-46页 |
| ·几丁质酶的最适温度与温度稳定性 | 第46页 |
| ·几丁质酶ChiA与ChiB抑制真菌孢子萌发 | 第46-47页 |
| ·几丁质酶ChiA、ChiB对真菌孢子萌发的半抑制浓度 | 第47-48页 |
| ·ChiA与ChiB对Bt的杀虫增效作用 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| ·本章小结 | 第50-52页 |
| 第三章 ChiB异源表达的C-端剪切及其缺失蛋白的性质 | 第52-69页 |
| ·实验材料 | 第52-54页 |
| ·菌株及病原真菌 | 第52-53页 |
| ·培养基 | 第53页 |
| ·检测几丁质酶酶活用试剂 | 第53页 |
| ·PCR及克隆所用试剂 | 第53页 |
| ·SDS-PAGE及酶谱分析所用试剂 | 第53页 |
| ·主要仪器 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-58页 |
| ·基质辅助激光解吸附离子化-飞行时间质谱 | 第54页 |
| ·胰蛋白酶切割位点分析 | 第54页 |
| ·Bt15A3几丁质酶粗酶的制备 | 第54-55页 |
| ·几丁质酶粗酶的纯化 | 第55页 |
| ·蛋白浓度与几丁质酶酶活测定 | 第55页 |
| ·ChiB结构域分析 | 第55页 |
| ·chiB基因系列缺失 | 第55-56页 |
| ·chiB系列缺失转化子蛋白的表达 | 第56页 |
| ·SDS-PAGE与酶谱分析 | 第56-57页 |
| ·金属离子及效应物对几丁质酶活力的影响 | 第57页 |
| ·系列缺失表达酶蛋白最佳pH、温度的测定 | 第57页 |
| ·杯碟法检测几丁质酶蛋白的抑真菌活性 | 第57-58页 |
| ·结果与分析 | 第58-66页 |
| ·质谱鉴定证明64 kDa蛋白是70 kDa蛋白的剪切产物 | 第58-59页 |
| ·几丁质酶粗蛋白的纯化 | 第59页 |
| ·ChiB结构域分析 | 第59-60页 |
| ·系列缺失转化子粗蛋白的制备与SDS-PAGE | 第60-62页 |
| ·系列缺失体表达蛋白酶谱分析 | 第62页 |
| ·不同金属离子与EDTA、SDS对系列缺失几丁质酶活性的影响 | 第62-63页 |
| ·系列缺失酶蛋白最适pH | 第63-64页 |
| ·各缺失酶蛋白的最适温度 | 第64页 |
| ·系列缺失酶蛋白抑制真菌孢子萌发 | 第64-66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| ·本章小结 | 第68-69页 |
| 第四章 几丁质酶chiB基因启动子序列的初步确认 | 第69-84页 |
| ·实验材料 | 第69-71页 |
| ·菌株 | 第69-70页 |
| ·培养基 | 第70页 |
| ·PCR及克隆所用试剂 | 第70页 |
| ·几丁质酶表达用试剂 | 第70页 |
| ·SDS-PAGE所用试剂 | 第70页 |
| ·Northem blot所用试剂 | 第70-71页 |
| ·主要仪器 | 第71页 |
| ·实验方法 | 第71-75页 |
| ·几丁质酶基因chiB启动子序列的预测 | 第71页 |
| ·chiB基因上游调控区域的系列缺失 | 第71-72页 |
| ·系列缺失基因表达酶活力的测定 | 第72页 |
| ·系列缺失基因特异蛋白的表达检测 | 第72页 |
| ·系列缺失基因mRNA表达量的测定 | 第72-75页 |
| ·结果与分析 | 第75-81页 |
| ·几丁质酶chiB基因上游序列分析 | 第75-76页 |
| ·潜在启动子序列缺失对几丁质酶表达水平的影响 | 第76-78页 |
| ·潜在启动子序列缺失对表达蛋白的影响 | 第78-79页 |
| ·潜在启动子序列缺失对转录mRNA量的影响 | 第79-80页 |
| ·chiB最小调控区域及真正启动子序列 | 第80-81页 |
| ·讨论 | 第81-83页 |
| ·本章小节 | 第83-84页 |
| 第五章 研究结论、创新点与展望 | 第84-86页 |
| ·研究结论 | 第84页 |
| ·Bt几丁质酶ChiA、ChiB具有一定的生防潜力 | 第84页 |
| ·ChiB异源表达时存在C-端剪切现象 | 第84页 |
| ·ChiB结合域在抑真菌中起重要作用 | 第84页 |
| ·确定几丁质酶chiB有效启动子序列 | 第84页 |
| ·创新点 | 第84-85页 |
| ·研究展望 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 个人简历及在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第99页 |
