| 附表 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-17页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 A型流感病毒的基本特征 | 第12-13页 |
| 1.3 流感病毒蛋白与宿主因子相互作用 | 第13页 |
| 1.4 流感病毒的内吞 | 第13-14页 |
| 1.5 DENN结构域蛋白 | 第14-15页 |
| 1.6 货物接头蛋白 | 第15-16页 |
| 1.7 研究目的与意义 | 第16-17页 |
| 第二章 宿主因子DENND1B正调控流感病毒的复制 | 第17-26页 |
| 2.1 材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 细胞系、菌株、质粒、病毒 | 第17页 |
| 2.1.2 实验试剂与软件 | 第17页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.4 引物 | 第18页 |
| 2.1.5 siRNA | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-23页 |
| 2.2.1 DENND1B下调效果检测 | 第19-20页 |
| 2.2.2 DENND1B干扰后病毒生长滴度测定 | 第20页 |
| 2.2.3 DENND1B敲除细胞系构建 | 第20-21页 |
| 2.2.4 过表达细胞系构建 | 第21-22页 |
| 2.2.5 过表达DENND1B细胞系病毒生长滴度测定 | 第22页 |
| 2.2.6 宿主因子DENND1B调控病毒复制结构区域研究 | 第22-23页 |
| 2.3 实验结果 | 第23-25页 |
| 2.3.1 DENND1B下调效果检测 | 第23页 |
| 2.3.2 下调DENND1B抑制流感病毒复制 | 第23-24页 |
| 2.3.3 DENND1B上调效果检测 | 第24页 |
| 2.3.4 上调DENND1B促进流感病毒的复制 | 第24-25页 |
| 2.3.5 宿主因子DENND1B N端结构域是调控病毒复制的关键区域 | 第25页 |
| 2.4 讨论 | 第25-26页 |
| 第三章 宿主因子DENND1B与流感病毒蛋白互作研究 | 第26-35页 |
| 3.1 材料 | 第26-27页 |
| 3.1.1 细胞系、菌株、质粒、病毒 | 第26页 |
| 3.1.2 实验试剂以及软件 | 第26页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第26页 |
| 3.1.4 引物 | 第26-27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-28页 |
| 3.2.1 质粒构建 | 第27页 |
| 3.2.2 免疫共沉淀检测宿主因子DENND1B与流感病毒蛋白相互作用 | 第27-28页 |
| 3.2.3 激光共聚焦检测宿主因子DENND1B与流感病毒PB1、PA共定位 | 第28页 |
| 3.2.4 免疫共沉淀检测宿主因子DENND1B与流感病毒PB1蛋白互作区域 | 第28页 |
| 3.3 实验结果 | 第28-34页 |
| 3.3.1 瞬时转染外源性免疫共沉淀 | 第28-32页 |
| 3.3.2 病毒感染后内源性免疫共沉淀 | 第32页 |
| 3.3.3 激光共聚焦检测DENND1B与PB1、PA蛋白共定位 | 第32-33页 |
| 3.3.4 免疫共沉淀检测宿主因子DENND1B与流感病毒蛋白PB1作用的关键区域 | 第33-34页 |
| 3.4 讨论 | 第34-35页 |
| 第四章 宿主因子DENND1B影响流感病毒复制环节研究 | 第35-41页 |
| 4.1 材料 | 第35页 |
| 4.1.1 细胞系、菌株、质粒、病毒 | 第35页 |
| 4.1.2 实验试剂以及软件 | 第35页 |
| 4.2 实验方法 | 第35-36页 |
| 4.2.1 病毒吸附 | 第35页 |
| 4.2.2 病毒聚合酶活性 | 第35-36页 |
| 4.2.3 病毒RNA合成 | 第36页 |
| 4.2.4 激光共聚焦检测过表达宿主因子DENND1B对NP细胞定位的影响 | 第36页 |
| 4.2.5 AP2B1与DENND1B以及CLTC相互作用验证 | 第36页 |
| 4.3 实验结果 | 第36-40页 |
| 4.3.1 宿主因子DENND1B不影响流感病毒吸附 | 第36-37页 |
| 4.3.2 宿主因子DENND1B不影响流感病毒聚合酶活性 | 第37-38页 |
| 4.3.3 宿主因子DENND1B对病毒RNA表达的影响 | 第38页 |
| 4.3.4 激光共聚焦检测过表达宿主因子DENND1B对NP细胞定位的影响 | 第38-39页 |
| 4.3.5 免疫共沉淀检测宿主因子DENND1B与AP2B1相互作用 | 第39页 |
| 4.3.6 免疫共沉淀检测AP2B1与网格蛋白相互作用 | 第39-40页 |
| 4.4 讨论 | 第40-41页 |
| 第五章 宿主因子DENND1B调控AP2B1表达以及细胞定位 | 第41-45页 |
| 5.1 材料 | 第41页 |
| 5.1.1 细胞系、菌株、质粒、病毒 | 第41页 |
| 5.1.2 实验试剂以及软件 | 第41页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第41页 |
| 5.2 实验方法 | 第41-42页 |
| 5.2.1 Western Blotting检测宿主因子DENND1B对AP2B1表达的影响 | 第41页 |
| 5.2.2 激光共聚焦检测宿主因子DENND1B对AP2B1细胞定位的影响 | 第41-42页 |
| 5.3 实验结果 | 第42-43页 |
| 5.3.1 Western Blotting检测DENND1B调控AP2B1的蛋白表达 | 第42页 |
| 5.3.2 激光共聚焦检测DENND1B调控AP2B1的细胞内定位 | 第42-43页 |
| 5.4 讨论 | 第43-45页 |
| 第六章 宿主因子DENND1B参与调控流感病毒内吞过程 | 第45-50页 |
| 6.1 材料 | 第45页 |
| 6.1.1 细胞系、菌株、质粒、病毒 | 第45页 |
| 6.1.2 实验试剂以及软件 | 第45页 |
| 6.1.3 实验仪器 | 第45页 |
| 6.2 实验方法 | 第45-46页 |
| 6.2.1 AP2B1下调效果检测 | 第45页 |
| 6.2.2 AP2B1干扰后病毒生长滴度测定 | 第45页 |
| 6.2.3 激光共聚焦检测AP2B1对流感病毒内吞的影响 | 第45页 |
| 6.2.4 激光共聚焦检测宿主因子DENND1B对流感病毒内吞的影响 | 第45-46页 |
| 6.3 实验结果 | 第46-48页 |
| 6.3.1 AP2B1下调效果检测 | 第46页 |
| 6.3.2 AP2B1干扰后病毒生长滴度测定 | 第46-47页 |
| 6.3.3 AP2B1参与流感病毒的内吞过程 | 第47页 |
| 6.3.4 宿主因子DENND1B正调控流感病毒的内吞 | 第47-48页 |
| 6.4 讨论 | 第48-50页 |
| 全文结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简历 | 第58页 |
