| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-19页 |
| 1.1 黑曲霉的工业应用概述 | 第11页 |
| 1.2 糖化酶的研究概述 | 第11-12页 |
| 1.2.1 糖化酶基因 | 第12页 |
| 1.2.2 黑曲霉糖化酶基因的研究进展 | 第12页 |
| 1.3 α-葡萄糖苷酶的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.3.1 α-葡萄糖苷酶基因 | 第12页 |
| 1.3.2 α-葡萄糖苷酶基因的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3.3 糖化酶和α-葡萄糖苷酶的联系与区别 | 第13-14页 |
| 1.3.4 α-葡萄糖苷酶工业应用研究 | 第14-15页 |
| 1.3.4.1 α-葡萄糖苷酶酶的重复利用 | 第15页 |
| 1.3.4.2 α-葡萄糖苷酶生产IMO的生产工业优化 | 第15页 |
| 1.4 基于高通量测序技术的转录组学研究 | 第15-16页 |
| 1.4.1 高通量测序技术的发展 | 第15-16页 |
| 1.4.2 黑曲霉的转录组学研究 | 第16页 |
| 1.5 真菌的代谢组学研究 | 第16-18页 |
| 1.5.1 代谢组学在真菌中的运用 | 第16-17页 |
| 1.5.2 核磁共振技术的应用 | 第17-18页 |
| 1.6 本论文的研究内容与意义 | 第18-19页 |
| 1.6.1 选题背景及目的 | 第18页 |
| 1.6.2 本研究的主要内容 | 第18-19页 |
| 第二章 黑曲霉galA缺失突变株的构建 | 第19-29页 |
| 2.1 实验仪器与材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第20页 |
| 2.1.3 培养基及溶液配制 | 第20-21页 |
| 2.1.4 所用引物序列 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 菌体培养及保种 | 第21-22页 |
| 2.2.2 大肠杆菌质粒提取及转化 | 第22-23页 |
| 2.2.2.1 大肠杆菌质粒的提取 | 第22页 |
| 2.2.2.2 大肠杆菌的转化 | 第22-23页 |
| 2.2.3 菌落PCR | 第23-24页 |
| 2.2.4 敲除表达盒galA1-N~R、N~R-galA2的扩增 | 第24页 |
| 2.2.5 PCR产物切胶回收 | 第24-25页 |
| 2.2.6 黑曲霉原生质体制备及转化 | 第25-26页 |
| 2.2.6.1 原生质体制备 | 第25页 |
| 2.2.6.2 原生质体的转化 | 第25-26页 |
| 2.2.7 黑曲霉突变株的鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3 结果分析 | 第27-29页 |
| 2.3.1 galA敲除表达盒重新转化大肠杆菌提取质粒 | 第27页 |
| 2.3.2 菌落PCR验证galA敲除表达盒 | 第27-28页 |
| 2.3.3 galA敲除表达盒扩增及纯化 | 第28页 |
| 2.3.4 黑曲霉突变株的鉴定 | 第28-29页 |
| 第三章 黑曲霉galA缺失的代谢组和转录组研究 | 第29-44页 |
| 3.1 实验仪器与材料 | 第29-30页 |
| 3.1.1 主要仪器与试剂 | 第29页 |
| 3.1.2 菌株 | 第29页 |
| 3.1.3 培养基及溶液配制 | 第29-30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-34页 |
| 3.2.1 菌体生长曲线 | 第30页 |
| 3.2.2 酶活测定 | 第30-32页 |
| 3.2.2.1 α-葡萄糖苷酶的酶活测定 | 第30-31页 |
| 3.2.2.2 糖化酶的酶活测定 | 第31-32页 |
| 3.2.3 黑曲霉galA基因缺失的代谢组分析 | 第32-33页 |
| 3.2.3.1 菌体代谢物提取 | 第32页 |
| 3.2.3.2 核磁共振NMR测试条件 | 第32页 |
| 3.2.3.3 核磁共振~1H NMR数据处理 | 第32-33页 |
| 3.2.4 黑曲霉galA基因缺失的转录组分析 | 第33-34页 |
| 3.3 结果分析 | 第34-44页 |
| 3.3.1 菌体生物量和酶活的变化 | 第34-35页 |
| 3.3.2 核磁共振~1H NMR谱图信号归属和化合物指认 | 第35-37页 |
| 3.3.3 差异代谢物分析 | 第37-39页 |
| 3.3.4 RNA提取及检测 | 第39-40页 |
| 3.3.5 高通量测序reads与参考的黑曲霉基因组的匹配情况统计 | 第40-41页 |
| 3.3.6 基因表达分析 | 第41-42页 |
| 3.3.7 差异基因GO富集分析 | 第42页 |
| 3.3.8 显著差异基因分析 | 第42-44页 |
| 第四章 整合多组学方法分析代谢途径变化 | 第44-52页 |
| 4.1 实验仪器与材料 | 第44-45页 |
| 4.1.1 主要仪器与材料 | 第44页 |
| 4.1.2 菌株 | 第44页 |
| 4.1.3 培养基 | 第44页 |
| 4.1.4 所用到引物序列 | 第44-45页 |
| 4.2 实验方法 | 第45-47页 |
| 4.2.1 4 个基因的实时荧光定量分析 | 第45-46页 |
| 4.2.2 己糖激酶的酶活测定 | 第46-47页 |
| 4.2.3 外源添加氨基酸测定糖化酶和α-葡萄糖苷酶活变化 | 第47页 |
| 4.3 结果分析 | 第47-52页 |
| 4.3.1 荧光实时定量分析4个基因 | 第47-48页 |
| 4.3.2 己糖激酶酶活测定 | 第48页 |
| 4.3.3 外源添加氨基酸后测定糖化酶和α-葡萄糖苷酶活变化 | 第48-49页 |
| 4.3.4 galA缺失对代谢变化影响 | 第49-52页 |
| 第五章 讨论 | 第52-57页 |
| 5.1 galA缺失对galA的转录水平及糖化酶活影响 | 第52页 |
| 5.2 对高通量转录组测序结果中转录水平差异最大的己糖激酶分析 | 第52-53页 |
| 5.3 关于α-葡萄糖苷酶酶活的计算方法 | 第53-55页 |
| 5.4 黑曲霉中α-葡萄糖苷酶基因分析 | 第55-56页 |
| 5.5 外源氨基酸的添加对酶活的影响 | 第56页 |
| 5.6 创新点及展望 | 第56-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 附录 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第69页 |
