| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第17-25页 |
| 1.1 研究工作的背景和意义 | 第17-18页 |
| 1.2 国内外相关研究分析 | 第18-22页 |
| 1.2.1 HSP70基因结构及蛋白结构特点 | 第18-19页 |
| 1.2.2 HSP70的转录调控和分泌 | 第19-20页 |
| 1.2.3 HSP70的结合蛋白/受体 | 第20页 |
| 1.2.4 免疫系统中HSP70功能的研究 | 第20-21页 |
| 1.2.5 鱼类HSP70研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3 本文的研究思路和内容 | 第22-23页 |
| 1.4 本论文的主要贡献与创新 | 第23页 |
| 1.5 本论文的结构安排 | 第23-25页 |
| 第二章 草鱼头肾白细胞中HSP70细胞因子功能的研究 | 第25-50页 |
| 2.1 概述 | 第25页 |
| 2.2 材料与方法 | 第25-32页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.2.1.1 实验动物 | 第25-26页 |
| 2.2.1.2 草鱼头肾白细胞的分离与培养 | 第26页 |
| 2.2.2 主要实验仪器、设备和试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.3 重组草鱼HSP70蛋白表达与纯化 | 第27页 |
| 2.2.4 细胞和组织中RNA提取及实时定量PCR检测 | 第27-29页 |
| 2.2.5 竞争-抑制酶联免疫吸附实验 | 第29-30页 |
| 2.2.5.1 样品制备 | 第29页 |
| 2.2.5.2 酶联免疫吸附实验过程 | 第29-30页 |
| 2.2.6 组织/细胞蛋白提取及免疫印迹实验 | 第30-31页 |
| 2.2.6.1 蛋白样品制备 | 第30页 |
| 2.2.6.2 免疫印迹实验过程 | 第30-31页 |
| 2.2.7 荧光素酶报告基因检测系统 | 第31页 |
| 2.2.8 荧光素酶-ATP检测法 | 第31-32页 |
| 2.2.9 内毒素检测 | 第32页 |
| 2.2.10 实验数据的统计学分析 | 第32页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第32-47页 |
| 2.3.1 草鱼重组HSP70蛋白的表达和纯化 | 第32-33页 |
| 2.3.2 草鱼HSP70参与炎症调控 | 第33-37页 |
| 2.3.2.1 LPS对草鱼HKLs细胞中HSP70表达和分泌的影响 | 第33-34页 |
| 2.3.2.2 嗜水汽单胞菌对草鱼HK中HSP70表达的影响 | 第34-35页 |
| 2.3.2.3 草鱼HSP70炎症条件下的表达特征讨论 | 第35-37页 |
| 2.3.3 草鱼HSP70对HKLs中细胞因子mRNA表达的影响 | 第37-39页 |
| 2.3.3.1 HSP70对HKLs中促炎因子mRNA表达的影响 | 第37-38页 |
| 2.3.3.2 HSP70对HKLs中抑炎因子mRNA表达的影响 | 第38页 |
| 2.3.3.3 HSP70对HKLs中细胞因子mRNA表达影响的讨论 | 第38-39页 |
| 2.3.4 草鱼HSP70对HKLs中细胞因子分泌的影响 | 第39-42页 |
| 2.3.4.1 HSP70对HKLs中细胞因子分泌的影响 | 第39-40页 |
| 2.3.4.2 HSP70对HKLs中ATP浓度的影响 | 第40-41页 |
| 2.3.4.3 HSP70对HKLs中细胞因子分泌的讨论 | 第41-42页 |
| 2.3.5 草鱼HSP70在HKLs中的信号通路检测 | 第42-47页 |
| 2.3.5.1 HSP70通过p38MAPK和NF-κB信号通路影响IL-1βmRNA表达 | 第43页 |
| 2.3.5.2 HSP70通过JNKMAPK和NF-κB信号通路影响TNF-αmRNA表达 | 第43-44页 |
| 2.3.5.3 HSP70通过p38MAPK信号通路影响IL-10mRNA表达 | 第44-45页 |
| 2.3.5.4 HSP70激活NF-κB信号通路 | 第45-46页 |
| 2.3.5.5 草鱼HSP70介导的信号通路的讨论 | 第46-47页 |
| 2.4 本章小结 | 第47-50页 |
| 第三章 草鱼HSP70与TLR4相互作用的探究 | 第50-60页 |
| 3.1 概述 | 第50-51页 |
| 3.2 材料与方法 | 第51-53页 |
| 3.2.1 草鱼肾细胞株CIK的培养 | 第51页 |
| 3.2.2 实验仪器、设备和常用试剂等 | 第51页 |
| 3.2.3 草鱼TLR4序列克隆 | 第51-52页 |
| 3.2.3.1 草鱼头肾细胞总RNA提取、反转录和cDNA文库构建 | 第51页 |
| 3.2.3.2 草鱼TLR4基因片段的克隆、测序 | 第51-52页 |
| 3.2.4 草鱼TLR4在CIK细胞中过表达验证 | 第52页 |
| 3.2.5 草鱼HSP70和TLR4相互作用的分子模拟 | 第52-53页 |
| 3.2.6 荧光素酶活性的检测 | 第53页 |
| 3.2.7 实验数据的统计学分析 | 第53页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第53-59页 |
| 3.3.1 草鱼HSP70和TLR4相互作用的分子模拟 | 第53-55页 |
| 3.3.2 草鱼TLR4序列克隆 | 第55-56页 |
| 3.3.3 草鱼TLR4在CIK中过表达验证 | 第56-57页 |
| 3.3.4 草鱼HSP70通过TLR4调节NF-κB转录活性 | 第57-58页 |
| 3.3.5 讨论 | 第58-59页 |
| 3.4 本章小结 | 第59-60页 |
| 第四章 草鱼HSP70对炎症反应的调控及其机制的研究 | 第60-85页 |
| 4.1 概述 | 第60页 |
| 4.2 材料与方法 | 第60-67页 |
| 4.2.1 实验动物和细胞分离 | 第60页 |
| 4.2.2 主要实验仪器、设备和试剂 | 第60页 |
| 4.2.3 嗜水汽单胞菌感染草鱼活体实验 | 第60-63页 |
| 4.2.3.1 嗜水气单胞菌的活化和培养 | 第60页 |
| 4.2.3.2 HSP70重组蛋白对感染嗜水气单胞菌的草鱼存活率影响实验 | 第60-61页 |
| 4.2.3.3 HSP70重组蛋白对感染嗜水气单胞菌的草鱼病理、生理指标影响的实验 | 第61-63页 |
| 4.2.4 草鱼HSP70对嗜水气单胞菌感染草鱼组织病理学研究 | 第63页 |
| 4.2.5 HE染色 | 第63-64页 |
| 4.2.6 生化指标检测 | 第64-67页 |
| 4.2.6.1 谷胱甘肽转移酶测定 | 第64-65页 |
| 4.6.2.2 肌酐测定 | 第65页 |
| 4.6.2.3 总抗氧化能力测定 | 第65-66页 |
| 4.6.2.4 丙二醛测定 | 第66页 |
| 4.6.2.5 过氧化氢酶测定 | 第66-67页 |
| 4.2.7 草鱼HSP70对嗜水气单胞菌感染草鱼组织细胞因子影响的研究 | 第67页 |
| 4.2.8 实验数据的统计学分析 | 第67页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第67-83页 |
| 4.3.1 草鱼HSP70对嗜水气单胞菌感染草鱼生存率的影响 | 第67-68页 |
| 4.3.2 草鱼HSP70对嗜水气单胞菌感染草鱼组织病理变化的影响 | 第68-76页 |
| 4.3.2.1 草鱼肝组织的病理改变 | 第68-69页 |
| 4.3.2.2 草鱼脾组织的病理改变 | 第69-70页 |
| 4.3.2.3 草鱼肠道组织的病理改变 | 第70-72页 |
| 4.3.2.4 草鱼肾组织的病理改变 | 第72-74页 |
| 4.3.2.5 草鱼皮肤组织的病理改变 | 第74-75页 |
| 4.3.2.6 草鱼腮组织的病理改变 | 第75-76页 |
| 4.3.2.7 HSP70对嗜水气单胞菌感染草鱼组织病理变化影响的讨论 | 第76页 |
| 4.3.3 HSP70对嗜水气单胞菌感染草鱼外周血生化指标的影响 | 第76-80页 |
| 4.3.3.1 草鱼外周血抗氧化指标的变化 | 第76-78页 |
| 4.3.3.3 草鱼外周血中肾功参数的变化 | 第78页 |
| 4.3.3.4 HSP70影响嗜水气单胞菌感染草鱼外周血生化指标的讨论 | 第78-80页 |
| 4.3.4 HSP70对嗜水气单胞菌感染草鱼细胞因子表达的影响 | 第80-83页 |
| 4.3.4.1 草鱼组织中细胞因子mRNA表达的变化 | 第80-81页 |
| 4.3.4.2 草鱼外周血细胞因子水平的变化 | 第81-82页 |
| 4.3.4.3 HSP70影响嗜水气单胞菌感染草鱼中细胞因子表达的讨论 | 第82-83页 |
| 4.4 本章小结 | 第83-85页 |
| 第五章 全文总结与展望 | 第85-87页 |
| 5.1 全文总结 | 第85-86页 |
| 5.2 后续工作展望 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 附录 致病性嗜水气单胞菌的分离和鉴定 | 第89-95页 |
| S.1 概述 | 第89页 |
| S.2 材料与方法 | 第89-91页 |
| S.2.1 TSA培养基和TSB培养液 | 第89页 |
| S.2.2主要实验仪器和试剂 | 第89页 |
| S.2.3 实验动物 | 第89-90页 |
| S.2.4 病原菌的来源 | 第90页 |
| S.2.5 病原菌的鉴定 | 第90-91页 |
| S.2.5.1 形态与菌落特征检查 | 第90页 |
| S.2.5.2 病原菌分子生物学鉴定 | 第90页 |
| S.2.5.3 序列分析与系统发育树的构建 | 第90-91页 |
| S.2.6 菌种的归属判定 | 第91页 |
| S.2.7 嗜水气单胞菌半致死量的确定 | 第91页 |
| S.3 实验结果与分析 | 第91-94页 |
| S.3.1 形态与菌落特征检查 | 第91页 |
| S.3.2 分子生物学鉴定结果 | 第91-93页 |
| S.3.3 菌种判断 | 第93页 |
| S.3.4 嗜水气单胞菌半致死量 | 第93-94页 |
| S.4 本章小结 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-112页 |
| 攻读博士学位期间取得的成果 | 第112页 |
