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草鱼热激蛋白70(HSP70)的细胞因子功能及参与炎症反应调节的研究

摘要第5-7页
abstract第7-9页
第一章 绪论第17-25页
    1.1 研究工作的背景和意义第17-18页
    1.2 国内外相关研究分析第18-22页
        1.2.1 HSP70基因结构及蛋白结构特点第18-19页
        1.2.2 HSP70的转录调控和分泌第19-20页
        1.2.3 HSP70的结合蛋白/受体第20页
        1.2.4 免疫系统中HSP70功能的研究第20-21页
        1.2.5 鱼类HSP70研究进展第21-22页
    1.3 本文的研究思路和内容第22-23页
    1.4 本论文的主要贡献与创新第23页
    1.5 本论文的结构安排第23-25页
第二章 草鱼头肾白细胞中HSP70细胞因子功能的研究第25-50页
    2.1 概述第25页
    2.2 材料与方法第25-32页
        2.2.1 实验材料第25-26页
            2.2.1.1 实验动物第25-26页
            2.2.1.2 草鱼头肾白细胞的分离与培养第26页
        2.2.2 主要实验仪器、设备和试剂第26-27页
        2.2.3 重组草鱼HSP70蛋白表达与纯化第27页
        2.2.4 细胞和组织中RNA提取及实时定量PCR检测第27-29页
        2.2.5 竞争-抑制酶联免疫吸附实验第29-30页
            2.2.5.1 样品制备第29页
            2.2.5.2 酶联免疫吸附实验过程第29-30页
        2.2.6 组织/细胞蛋白提取及免疫印迹实验第30-31页
            2.2.6.1 蛋白样品制备第30页
            2.2.6.2 免疫印迹实验过程第30-31页
        2.2.7 荧光素酶报告基因检测系统第31页
        2.2.8 荧光素酶-ATP检测法第31-32页
        2.2.9 内毒素检测第32页
        2.2.10 实验数据的统计学分析第32页
    2.3 结果与讨论第32-47页
        2.3.1 草鱼重组HSP70蛋白的表达和纯化第32-33页
        2.3.2 草鱼HSP70参与炎症调控第33-37页
            2.3.2.1 LPS对草鱼HKLs细胞中HSP70表达和分泌的影响第33-34页
            2.3.2.2 嗜水汽单胞菌对草鱼HK中HSP70表达的影响第34-35页
            2.3.2.3 草鱼HSP70炎症条件下的表达特征讨论第35-37页
        2.3.3 草鱼HSP70对HKLs中细胞因子mRNA表达的影响第37-39页
            2.3.3.1 HSP70对HKLs中促炎因子mRNA表达的影响第37-38页
            2.3.3.2 HSP70对HKLs中抑炎因子mRNA表达的影响第38页
            2.3.3.3 HSP70对HKLs中细胞因子mRNA表达影响的讨论第38-39页
        2.3.4 草鱼HSP70对HKLs中细胞因子分泌的影响第39-42页
            2.3.4.1 HSP70对HKLs中细胞因子分泌的影响第39-40页
            2.3.4.2 HSP70对HKLs中ATP浓度的影响第40-41页
            2.3.4.3 HSP70对HKLs中细胞因子分泌的讨论第41-42页
        2.3.5 草鱼HSP70在HKLs中的信号通路检测第42-47页
            2.3.5.1 HSP70通过p38MAPK和NF-κB信号通路影响IL-1βmRNA表达第43页
            2.3.5.2 HSP70通过JNKMAPK和NF-κB信号通路影响TNF-αmRNA表达第43-44页
            2.3.5.3 HSP70通过p38MAPK信号通路影响IL-10mRNA表达第44-45页
            2.3.5.4 HSP70激活NF-κB信号通路第45-46页
            2.3.5.5 草鱼HSP70介导的信号通路的讨论第46-47页
    2.4 本章小结第47-50页
第三章 草鱼HSP70与TLR4相互作用的探究第50-60页
    3.1 概述第50-51页
    3.2 材料与方法第51-53页
        3.2.1 草鱼肾细胞株CIK的培养第51页
        3.2.2 实验仪器、设备和常用试剂等第51页
        3.2.3 草鱼TLR4序列克隆第51-52页
            3.2.3.1 草鱼头肾细胞总RNA提取、反转录和cDNA文库构建第51页
            3.2.3.2 草鱼TLR4基因片段的克隆、测序第51-52页
        3.2.4 草鱼TLR4在CIK细胞中过表达验证第52页
        3.2.5 草鱼HSP70和TLR4相互作用的分子模拟第52-53页
        3.2.6 荧光素酶活性的检测第53页
        3.2.7 实验数据的统计学分析第53页
    3.3 结果与讨论第53-59页
        3.3.1 草鱼HSP70和TLR4相互作用的分子模拟第53-55页
        3.3.2 草鱼TLR4序列克隆第55-56页
        3.3.3 草鱼TLR4在CIK中过表达验证第56-57页
        3.3.4 草鱼HSP70通过TLR4调节NF-κB转录活性第57-58页
        3.3.5 讨论第58-59页
    3.4 本章小结第59-60页
第四章 草鱼HSP70对炎症反应的调控及其机制的研究第60-85页
    4.1 概述第60页
    4.2 材料与方法第60-67页
        4.2.1 实验动物和细胞分离第60页
        4.2.2 主要实验仪器、设备和试剂第60页
        4.2.3 嗜水汽单胞菌感染草鱼活体实验第60-63页
            4.2.3.1 嗜水气单胞菌的活化和培养第60页
            4.2.3.2 HSP70重组蛋白对感染嗜水气单胞菌的草鱼存活率影响实验第60-61页
            4.2.3.3 HSP70重组蛋白对感染嗜水气单胞菌的草鱼病理、生理指标影响的实验第61-63页
        4.2.4 草鱼HSP70对嗜水气单胞菌感染草鱼组织病理学研究第63页
        4.2.5 HE染色第63-64页
        4.2.6 生化指标检测第64-67页
            4.2.6.1 谷胱甘肽转移酶测定第64-65页
            4.6.2.2 肌酐测定第65页
            4.6.2.3 总抗氧化能力测定第65-66页
            4.6.2.4 丙二醛测定第66页
            4.6.2.5 过氧化氢酶测定第66-67页
        4.2.7 草鱼HSP70对嗜水气单胞菌感染草鱼组织细胞因子影响的研究第67页
        4.2.8 实验数据的统计学分析第67页
    4.3 实验结果与分析第67-83页
        4.3.1 草鱼HSP70对嗜水气单胞菌感染草鱼生存率的影响第67-68页
        4.3.2 草鱼HSP70对嗜水气单胞菌感染草鱼组织病理变化的影响第68-76页
            4.3.2.1 草鱼肝组织的病理改变第68-69页
            4.3.2.2 草鱼脾组织的病理改变第69-70页
            4.3.2.3 草鱼肠道组织的病理改变第70-72页
            4.3.2.4 草鱼肾组织的病理改变第72-74页
            4.3.2.5 草鱼皮肤组织的病理改变第74-75页
            4.3.2.6 草鱼腮组织的病理改变第75-76页
            4.3.2.7 HSP70对嗜水气单胞菌感染草鱼组织病理变化影响的讨论第76页
        4.3.3 HSP70对嗜水气单胞菌感染草鱼外周血生化指标的影响第76-80页
            4.3.3.1 草鱼外周血抗氧化指标的变化第76-78页
            4.3.3.3 草鱼外周血中肾功参数的变化第78页
            4.3.3.4 HSP70影响嗜水气单胞菌感染草鱼外周血生化指标的讨论第78-80页
        4.3.4 HSP70对嗜水气单胞菌感染草鱼细胞因子表达的影响第80-83页
            4.3.4.1 草鱼组织中细胞因子mRNA表达的变化第80-81页
            4.3.4.2 草鱼外周血细胞因子水平的变化第81-82页
            4.3.4.3 HSP70影响嗜水气单胞菌感染草鱼中细胞因子表达的讨论第82-83页
    4.4 本章小结第83-85页
第五章 全文总结与展望第85-87页
    5.1 全文总结第85-86页
    5.2 后续工作展望第86-87页
致谢第87-89页
附录 致病性嗜水气单胞菌的分离和鉴定第89-95页
    S.1 概述第89页
    S.2 材料与方法第89-91页
        S.2.1 TSA培养基和TSB培养液第89页
        S.2.2主要实验仪器和试剂第89页
        S.2.3 实验动物第89-90页
        S.2.4 病原菌的来源第90页
        S.2.5 病原菌的鉴定第90-91页
            S.2.5.1 形态与菌落特征检查第90页
            S.2.5.2 病原菌分子生物学鉴定第90页
            S.2.5.3 序列分析与系统发育树的构建第90-91页
        S.2.6 菌种的归属判定第91页
        S.2.7 嗜水气单胞菌半致死量的确定第91页
    S.3 实验结果与分析第91-94页
        S.3.1 形态与菌落特征检查第91页
        S.3.2 分子生物学鉴定结果第91-93页
        S.3.3 菌种判断第93页
        S.3.4 嗜水气单胞菌半致死量第93-94页
    S.4 本章小结第94-95页
参考文献第95-112页
攻读博士学位期间取得的成果第112页

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