| 中文摘要 | 第11-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 1 前言 | 第18-31页 |
| 1.1 植物病害的生物防治 | 第18-20页 |
| 1.1.1 植物病害生物防治的重要性 | 第18页 |
| 1.1.2 植物病害生防微生物的种类 | 第18-19页 |
| 1.1.3 杨树病害的生物防治 | 第19-20页 |
| 1.2 植物内生菌研究进展 | 第20-25页 |
| 1.2.1 植物内生菌的分类 | 第21-23页 |
| 1.2.2 植物内生菌的定殖 | 第23-24页 |
| 1.2.3 植物内生菌的防病机制 | 第24-25页 |
| 1.3 抗菌肽研究进展 | 第25-28页 |
| 1.3.1 抗菌肽的分类 | 第25-27页 |
| 1.3.2 芽孢杆菌产生的抗菌肽 | 第27-28页 |
| 1.4 研究内容和技术路线 | 第28-31页 |
| 1.4.1 主要研究内容 | 第28-30页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第30-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-51页 |
| 2.1 试验材料 | 第31-32页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第31页 |
| 2.1.2 培养基 | 第31页 |
| 2.1.3 主要软件 | 第31-32页 |
| 2.1.4 主要药品试剂 | 第32页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第32页 |
| 2.2 N6-34菌株的鉴定 | 第32-35页 |
| 2.2.1 菌落、菌体形态观察与生理生化指标测定 | 第32-33页 |
| 2.2.2 16 SrRNA基因序列测定和对比分析 | 第33-34页 |
| 2.2.3 gyrB基因序列测定和对比分析 | 第34-35页 |
| 2.2.4 Biolog自动微生物鉴定系统鉴定 | 第35页 |
| 2.3 N6-34菌株产生的抗菌活性物质的分离纯化 | 第35-38页 |
| 2.3.1 菌株发酵液的制备 | 第35页 |
| 2.3.2 抗菌活性物质粗物和指示菌孢子悬浮液的制备 | 第35-36页 |
| 2.3.3 抗菌活性物质的硫酸铵盐析 | 第36页 |
| 2.3.4 抗菌活性物质在不同溶剂中的溶解性测定 | 第36页 |
| 2.3.5 抗菌活性物质的甲醇抽提 | 第36-37页 |
| 2.3.6 抗菌活性物质DEAESepharoseFastFlow离子交换柱层析 | 第37页 |
| 2.3.7 抗菌活性物质的SephadexG-25凝胶柱层析 | 第37页 |
| 2.3.8 活性物质经SephadexG-25洗脱后活性峰物质的HPLC检测 | 第37页 |
| 2.3.9 抗菌活性组分的制备 | 第37-38页 |
| 2.3.10 抗菌活性组分的纯度检测 | 第38页 |
| 2.3.11 各活性组分混合物的协同抑菌作用检测 | 第38页 |
| 2.4 N6-34菌株产生的抗菌活性组分的结构鉴别 | 第38-39页 |
| 2.4.1 抗菌活性组分分子量的测定 | 第38页 |
| 2.4.2 抗菌活性组分的二级质谱分析(ESI-MS/MS) | 第38页 |
| 2.4.3 抗菌活性组分的氨基酸组成分析 | 第38-39页 |
| 2.5 抗菌活性组分5的理化性质研究 | 第39-40页 |
| 2.5.1 对热的稳定性 | 第39页 |
| 2.5.2 对pH的稳定性 | 第39页 |
| 2.5.3 对紫外线照射的敏感性 | 第39页 |
| 2.5.4 对水解蛋白酶的稳定性 | 第39页 |
| 2.5.5 对植物病原真菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC)的测定 | 第39-40页 |
| 2.6 N6-34菌株产抗菌物质发酵培养基的优化 | 第40-42页 |
| 2.6.1 抗菌活性物质效价的测定 | 第40页 |
| 2.6.2 基础发酵培养基的筛选 | 第40页 |
| 2.6.3 发酵培养基的优化 | 第40-42页 |
| 2.7 N6-34菌株的抑/杀菌机制研究 | 第42-45页 |
| 2.7.1 N6-34菌株抑菌谱的测定 | 第42页 |
| 2.7.2 N6-34菌株对病原真菌菌丝生长的抑制作用 | 第42页 |
| 2.7.3 N6-34菌株产生的抗菌活性物质对病原真菌孢子萌发的抑制作用 | 第42-43页 |
| 2.7.4 扫描电镜(SEM)观察N6-34菌株对病原菌的抑制作用 | 第43页 |
| 2.7.5 透射电镜(TEM)观察N6-34菌株对病原菌的抑制作用 | 第43-44页 |
| 2.7.6 N6-34菌株发酵液中关键降解酶的测定 | 第44-45页 |
| 2.8 N6-34菌株的定殖特性 | 第45-49页 |
| 2.8.1 N6-34菌株和GFP标记菌株(N6-34-GFP)的生物学特性对比 | 第45页 |
| 2.8.2 N6-34-GFP菌株的特性 | 第45-46页 |
| 2.8.3 N6-34-GFP菌株在杨树根、茎、叶内及根际土壤的定殖 | 第46页 |
| 2.8.4 实时荧光定量PCR监测N6-34菌株对尖孢镰刀菌的抑制作用 | 第46-49页 |
| 2.9 N6-34菌株对杨树根际和根表土壤真菌多样性的影响 | 第49-51页 |
| 2.9.1 试验设计 | 第49页 |
| 2.9.2 样品采集与处理 | 第49页 |
| 2.9.3 土壤样品总DNA的提取 | 第49页 |
| 2.9.4 土壤样品真菌群落的高通量测序 | 第49-50页 |
| 2.9.5 高通量数据基本分析 | 第50页 |
| 2.9.6 数据统计分析 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-100页 |
| 3.1 N6-34菌株的鉴定结果 | 第51-55页 |
| 3.1.1 菌体形态、培养特征与生理生化特征 | 第51-52页 |
| 3.1.2 16SrDNA基因序列同源性分析结果 | 第52-53页 |
| 3.1.3 gyrB基因序列同源性分析结果 | 第53-55页 |
| 3.1.4 Biolog自动微生物鉴定系统鉴定结果 | 第55页 |
| 3.2 N6-34菌株产生的抗菌活性物质的分离纯化 | 第55-64页 |
| 3.2.1 活性物质硫酸铵盐析结果 | 第55-57页 |
| 3.2.2 活性物质在不同溶剂中的溶解性 | 第57页 |
| 3.2.3 活性物质甲醇抽提结果 | 第57页 |
| 3.2.4 活性物质DEAESepharoseFastFlow离子交换柱层析结果 | 第57-58页 |
| 3.2.5 活性物质经SephadexG-25柱层析结果 | 第58-60页 |
| 3.2.6 活性物质经SephadexG-25洗脱后活性峰的HPLC检测结果 | 第60-62页 |
| 3.2.7 各分离组分的抑菌活性 | 第62页 |
| 3.2.8 各活性组分的纯度检测结果 | 第62-64页 |
| 3.2.9 各活性组分混合物的协同抑菌效果 | 第64页 |
| 3.3 N6-34菌株抗菌活性组分的结构鉴别 | 第64-71页 |
| 3.3.1 抗菌活性组分的分子量 | 第64-66页 |
| 3.3.2 抗菌活性组分的二级质谱(ESI-MS/MS)分析结果 | 第66-67页 |
| 3.3.3 抗菌活性组分的氨基酸组成分析结果 | 第67页 |
| 3.3.4 抗菌活性组分的结构鉴别 | 第67-71页 |
| 3.4 抗菌活性组分5(C17fengycinB)的理化性质 | 第71-73页 |
| 3.4.1 对热的稳定性 | 第71页 |
| 3.4.2 对pH的稳定性 | 第71页 |
| 3.4.3 对紫外线照射的敏感性 | 第71-72页 |
| 3.4.4 对水解蛋白酶的稳定性 | 第72-73页 |
| 3.4.5 对几种植物病原真菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度 | 第73页 |
| 3.5 N6-34菌株产抗菌活性物质发酵培养基的优化结果 | 第73-82页 |
| 3.5.1 生物检测法测定抗菌活性物质效价的标准曲线 | 第73-74页 |
| 3.5.2 基础发酵培养基的筛选结果 | 第74页 |
| 3.5.3 发酵培养基的优化结果 | 第74-82页 |
| 3.6 N6-34菌株抑/杀菌机制研究 | 第82-88页 |
| 3.6.1 N6-34菌株的抑菌谱 | 第82页 |
| 3.6.2 N6-34菌株对病原真菌菌丝生长的抑制作用 | 第82-84页 |
| 3.6.3 N6-34菌株产生的抗菌活性物质对病原真菌孢子萌发的抑制作用 | 第84-85页 |
| 3.6.4 N6-34菌株对病原真菌抑制作用的扫描电镜(SEM)观察结果 | 第85页 |
| 3.6.5 N6-34菌株对病原真菌抑制作用的透射电镜(TEM)观察结果 | 第85-86页 |
| 3.6.6 N6-34菌株发酵液中的关键降解酶测定结果 | 第86-88页 |
| 3.7 N6-34菌株在杨树根际和根、茎、叶内的定殖特性 | 第88-95页 |
| 3.7.1 N6-34和N6-34-GFP的生物学特性对比 | 第88-89页 |
| 3.7.2 N6-34-GFP菌株的特性 | 第89-90页 |
| 3.7.3 N6-34-GFP菌株在杨树根际和根、茎、叶中的定殖数量 | 第90-91页 |
| 3.7.4 激光共聚焦观察N6-34-GFP菌株在杨树根、茎和叶中的定殖部位 | 第91-92页 |
| 3.7.5 实时荧光定量PCR监测N6-34菌株对尖孢镰刀菌的抑制作用 | 第92-95页 |
| 3.8 N6-34菌株对杨树根际和根表土壤真菌群落组成的影响 | 第95-100页 |
| 3.8.1 稀释性曲线 | 第95页 |
| 3.8.2 alpha多样性分析 | 第95-96页 |
| 3.8.3 beta多样性分析 | 第96-97页 |
| 3.8.4 样品真菌群落特征与多样性 | 第97-100页 |
| 4 讨论 | 第100-105页 |
| 4.1 枯草芽孢杆菌的鉴定 | 第100页 |
| 4.2 活性物质的结构鉴别 | 第100-102页 |
| 4.3 芽孢杆菌作为生物杀菌剂的应用前景 | 第102-103页 |
| 4.4 本论文的创新点及下一步的研究计划 | 第103-105页 |
| 4.4.1 本论文的创新点 | 第103-104页 |
| 4.4.2 本论文下一步的研究计划 | 第104-105页 |
| 5 结论 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 攻读学位期间发表的论文及成果 | 第119-120页 |
| 附录各组分的二级质谱图 | 第120-125页 |
