| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 p53基因研究概述 | 第10-12页 |
| 1.2 p53蛋白结构特征 | 第12-13页 |
| 1.3 p53的生物学功能 | 第13-15页 |
| 1.3.1 调节细胞周期 | 第13页 |
| 1.3.2 促进细胞凋亡 | 第13-14页 |
| 1.3.3 参与肿瘤发生与疾病反应 | 第14-15页 |
| 1.3.4 参与抗病毒免疫反应 | 第15页 |
| 1.4 NF-κB与p | 第15-16页 |
| 1.5 PKR与p | 第16-17页 |
| 1.6 鱼类p53研究进展 | 第17页 |
| 1.7 研究目的与意义 | 第17-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 细胞株、载体与菌种 | 第19页 |
| 2.1.2 主要仪器与试剂 | 第19-22页 |
| 2.1.3 引物表 | 第22-23页 |
| 2.2 相关软件 | 第23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-34页 |
| 2.3.1 草鱼p53全长cDNA的克隆 | 第23-26页 |
| 2.3.2 草鱼p53启动子的克隆 | 第26-27页 |
| 2.3.3 草鱼p53的系统进化分析 | 第27页 |
| 2.3.4 细胞培养 | 第27-28页 |
| 2.3.5 p53在草鱼各组织以及CIK细胞中的表达水平分析 | 第28-29页 |
| 2.3.6 草鱼p53原核表达载体构建及蛋白纯化 | 第29-30页 |
| 2.3.7 草鱼p53真核表达载体构建 | 第30-31页 |
| 2.3.8 草鱼p65与p53以及草鱼p53与PKR启动子序列的亲和性分析 | 第31页 |
| 2.3.9 细胞转染及双荧光素酶分析 | 第31-32页 |
| 2.3.10 p53在CIK细胞中的敲降(knock-down)分析 | 第32-33页 |
| 2.3.11 草鱼p53敲降后p65与PKR的转录水平检测 | 第33-34页 |
| 第三章 结果与分析 | 第34-46页 |
| 3.1 草鱼p53的克隆及分析 | 第34-38页 |
| 3.1.1 草鱼p53全长cDNA的克隆 | 第34页 |
| 3.1.2 草鱼p53基因序列分析 | 第34-37页 |
| 3.1.3 草鱼p53基因的系统进化分析 | 第37-38页 |
| 3.2 草鱼p53启动子的克隆及其分析 | 第38页 |
| 3.3 草鱼p53基因的定量表达分析 | 第38-39页 |
| 3.3.1 草鱼p53基因的组织表达分析 | 第38-39页 |
| 3.3.2 草鱼p53基因在CIK细胞中的表达分析 | 第39页 |
| 3.4 草鱼p65与p53的启动子及草鱼p53与PKR的启动子亲和性分析 | 第39-42页 |
| 3.4.1 草鱼p65与p53启动子的非放射性凝胶阻滞分析 | 第39-41页 |
| 3.4.2 草鱼p53与PKR启动子的非放射性凝胶阻滞分析 | 第41-42页 |
| 3.5 草鱼p53的转录调控分析 | 第42-45页 |
| 3.5.1 草鱼p53启动子活性分析 | 第42-43页 |
| 3.5.2 草鱼p65对p53基因的转录调控分析 | 第43-44页 |
| 3.5.3 草鱼p53对PKR基因的转录调控分析 | 第44-45页 |
| 3.6 草鱼p53敲降后p65、PKR的转录表达分析 | 第45-46页 |
| 第四章 讨论 | 第46-50页 |
| 4.1 草鱼p53的系统进化树分析 | 第46页 |
| 4.2 草鱼p53的表达特征分析 | 第46-47页 |
| 4.3 草鱼p65与p53的转录调控分析 | 第47-48页 |
| 4.4 草鱼p53与PKR的转录调控分析 | 第48页 |
| 4.5 草鱼p53介导的p65与PKR的转录水平分析 | 第48-50页 |
| 第五章 主要结论、创新点及展望 | 第50-51页 |
| 5.1 主要结论 | 第50页 |
| 5.2 创新点 | 第50页 |
| 5.3 展望 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-62页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第62页 |
