| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-22页 |
| 1 细胞重编程研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1 核移植 | 第12-13页 |
| 1.2 细胞融合 | 第13-14页 |
| 1.3 胞质提取物孵育重编程 | 第14页 |
| 1.4 诱导多能干细胞 | 第14-15页 |
| 2 iPSCs研究进展 | 第15-17页 |
| 2.1 iPSCs的发展历程 | 第15-16页 |
| 2.2 piPSCs的研究进展 | 第16-17页 |
| 3 多能性干细胞状态的研究 | 第17-21页 |
| 3.1 原始态和始发态 | 第17-18页 |
| 3.2 不同多能性状态之间的相互转换 | 第18-20页 |
| 3.2.1 添加小分子化合物来实现多能性的转变 | 第19页 |
| 3.2.2 基础培养基对多能性的影响 | 第19-20页 |
| 3.3 猪PSCs向Naive状态转化的研究进展 | 第20-21页 |
| 4 研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| 第二部分 试验部分 | 第22-54页 |
| 第一章: 促进piPSCs向Naive状态转化培养条件的筛选 | 第23-34页 |
| 1 材料与方法 | 第23-26页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第23-25页 |
| 1.2 方法 | 第25-26页 |
| 1.2.1 基质胶(Matrigel)铺底 | 第25页 |
| 1.2.2 饲养层的制备 | 第25页 |
| 1.2.3 piPSCs细胞的传代培养 | 第25-26页 |
| 1.2.4 碱性磷酸酶活性检测(AP染色) | 第26页 |
| 1.2.5 免疫荧光染色 | 第26页 |
| 2 结果与分析 | 第26-31页 |
| 2.1 不同基础培养基添加5iL对piPSCs的影响 | 第26-29页 |
| 2.1.1 克隆形态的变化 | 第26-28页 |
| 2.1.2 碱性磷酸酶染色(AP染色) | 第28页 |
| 2.1.3 免疫荧光检测 | 第28-29页 |
| 2.2 添加不同小分子化合物组合的培养基对piPSCs的影响 | 第29-31页 |
| 3 讨论与分析 | 第31-33页 |
| 3.1 不同基础液添加5iL后对piPSCs的影响 | 第31-32页 |
| 3.2 添加不同小分子化合物组合的培养基对piPSCs的影响 | 第32-33页 |
| 4 小结 | 第33-34页 |
| 第二章 利用2iLbL培养体系进行piPSCs的传代及进一步生物学鉴定 | 第34-46页 |
| 1 材料与方法 | 第34-36页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第34-35页 |
| 1.1.1 主要试剂 | 第34页 |
| 1.1.2 主要设备 | 第34-35页 |
| 1.2 实验方法 | 第35-36页 |
| 1.2.1 piPSCs的收集与微量反转录为cDNA | 第35页 |
| 1.2.2 实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测 | 第35-36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-42页 |
| 2.1 传代过程中piPSC形态变化 | 第36-37页 |
| 2.2 2iLbL中piPSC生物学特性的检测及比较分析 | 第37-40页 |
| 2.2.1 碱性磷酸酶染色(AP染色) | 第37页 |
| 2.2.2 免疫荧光及相对荧光强度分析 | 第37-40页 |
| 2.3 2iLbL促进piPSC Naive转化的小分子化合物成分的初步筛选 | 第40-42页 |
| 3 讨论与分析 | 第42-45页 |
| 3.1 2iLbL培养体系对piPSCs向Naive状态转化的影响 | 第42-44页 |
| 3.2 2iLbL培养体系对piPSCs向Naive状态转化机理的初步研究 | 第44-45页 |
| 4 小结 | 第45-46页 |
| 第三章 无饲养层或无Dox条件下2iLbL对猪piPSCs多能性维持的影响 | 第46-54页 |
| 1 材料与方法 | 第46-47页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第46页 |
| 1.1.1 主要试剂 | 第46页 |
| 1.1.2 主要设备 | 第46页 |
| 1.2 实验方法 | 第46-47页 |
| 1.2.1 piPSCs的单细胞传代能力检测 | 第46-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-50页 |
| 2.1 无饲养层条件下2iLbL对piPSCs的影响 | 第47-50页 |
| 2.1.1 细胞形态变化 | 第47页 |
| 2.1.2 单细胞传代 | 第47-48页 |
| 2.1.3 碱性磷酸酶活性检测 | 第48页 |
| 2.1.4 免疫荧光检测 | 第48-50页 |
| 2.2 无Dox条件下对piPSCs的影响 | 第50页 |
| 3 讨论与分析 | 第50-52页 |
| 3.1 无饲养层条件下2iLbL对piPSCs的影响 | 第50-52页 |
| 3.2 无Dox条件下2iLbL对piPSCs的影响 | 第52页 |
| 4 小结 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读硕士期间发表学术论文 | 第61页 |
