| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 第一章 引言 | 第13-20页 |
| 1.1 JEV分子生物学特性 | 第13-15页 |
| 1.1.1 JEV物理特性及基因组结构 | 第13页 |
| 1.1.2 JEV结构蛋白功能与特点 | 第13-14页 |
| 1.1.3 JEV非结构蛋白的功能与特点 | 第14-15页 |
| 1.2 JEV复制机制研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2.1 病毒的入侵 | 第15-16页 |
| 1.2.2 病毒基因组的翻译与复制 | 第16页 |
| 1.2.3 病毒粒子的组装与释放 | 第16-17页 |
| 1.2.4 JEV的致病机制 | 第17页 |
| 1.3 JEV与宿主相互作用研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3.1 JEV蛋白与宿主蛋白的相互作用对病毒复制的影响 | 第17-18页 |
| 1.3.2 病毒和宿主因子相互作用的研究方法 | 第18页 |
| 1.4 信号肽酶复合体 | 第18-19页 |
| 1.5 研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 SPCS1对JEV复制的影响 | 第20-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第20页 |
| 2.1.1 主要材料、试剂 | 第20页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-22页 |
| 2.2.1 SIRNA设计合成与转染 | 第20页 |
| 2.2.2 SIRNA转染与病毒感染 | 第20-21页 |
| 2.2.3 间接免疫荧光试验(IFA) | 第21页 |
| 2.2.4 高内涵细胞筛选系统成像与分析 | 第21页 |
| 2.2.5 细胞增殖活性检测 | 第21页 |
| 2.2.6 SPCS1缺失对JEV感染率的影响 | 第21页 |
| 2.2.7 SPCS1缺失对JEV感染致细胞病变影响的观察 | 第21-22页 |
| 2.2.8 JEVE蛋白与NS1蛋白的WESTERNBLOT检测 | 第22页 |
| 2.2.9 病毒效价测定 | 第22页 |
| 2.2.10 SPCS1功能补偿实验 | 第22页 |
| 2.3 实验结果 | 第22-26页 |
| 2.3.1 SIRNA干扰SPCS1后降低JEV复制 | 第22-23页 |
| 2.3.2 JEV对SPCS1KO细胞感染率降低 | 第23-24页 |
| 2.3.3 JEV对SPCS1KO细胞不造成细胞病变 | 第24页 |
| 2.3.4 SPCS1缺失降低病毒蛋白表达 | 第24-25页 |
| 2.3.5 SPCS1缺失显著降低JEV复制水平 | 第25页 |
| 2.3.6 补偿SPCS1提高SPCS1KO细胞中JEV复制水平 | 第25-26页 |
| 2.4 讨论 | 第26-28页 |
| 第三章 SPCS1缺失对JEV复制环节影响的研究 | 第28-38页 |
| 3.1 实验材料 | 第28页 |
| 3.1.1 主要材料、试剂 | 第28页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第28页 |
| 3.2 实验方法 | 第28-31页 |
| 3.2.1 稳定表达JEVC-PRM-E细胞系的构建 | 第28页 |
| 3.2.2 JEV复制缺陷性病毒的构建和单轮感染能力检测 | 第28-30页 |
| 3.2.3 RRPS对HEK-293与SPCS1KOHEK-293细胞入侵性实验 | 第30页 |
| 3.2.4 反转录荧光定量PCR实验 | 第30页 |
| 3.2.5 WB检测JEVE蛋白、PRM与NS1蛋白 | 第30页 |
| 3.2.6 电子显微镜观察JEV的子代病毒 | 第30页 |
| 3.2.7 报告型病毒组装系统分析病毒的组装 | 第30-31页 |
| 3.3 实验结果 | 第31-36页 |
| 3.3.1 IFA鉴定BJEV-CME细胞系JEVE的表达 | 第31-32页 |
| 3.3.2 RRPS单轮感染能力检测 | 第32页 |
| 3.3.3 SPCS1不影响JEV入侵 | 第32-33页 |
| 3.3.4 SPCS1不影响JEV基因组的复制 | 第33页 |
| 3.3.5 WB鉴定SPCS1不影响JEV蛋白的翻译 | 第33-34页 |
| 3.3.6 电子显微镜观察SPCS1影响子代病毒颗粒的组装 | 第34-35页 |
| 3.3.7 SPCS1缺失影响病毒组装 | 第35-36页 |
| 3.4 讨论 | 第36-38页 |
| 第四章 JEVNS2B与SPCS1的相互作用 | 第38-50页 |
| 4.1 实验材料 | 第38页 |
| 4.1.1 主要材料、试剂 | 第38页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第38页 |
| 4.2 实验方法 | 第38-39页 |
| 4.2.1 双分子荧光互补实验(BIFC) | 第38-39页 |
| 4.2.2 免疫共沉淀 | 第39页 |
| 4.3 实验结果 | 第39-48页 |
| 4.3.1 SPCS1与NS2B在细胞中的相互作用 | 第39-40页 |
| 4.3.2 NS2B的缺失突变与定点突变 | 第40-41页 |
| 4.3.3 NS2B的跨膜区与SPCS1具有相互作用 | 第41-43页 |
| 4.3.4 与SPCS1相互作用的NS2B关键位点鉴定 | 第43-45页 |
| 4.3.5 SPCS1的跨膜区与NS2B具有相互作用 | 第45-47页 |
| 4.3.6 BIFC分析JEVNS2B截短突变体与NS2A相互作用区域 | 第47页 |
| 4.3.7 NS2B与SPCS1、NS2A相互作用模型 | 第47-48页 |
| 4.4 讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 全文结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简历 | 第58页 |
