| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 第一章 引言 | 第13-20页 |
| 1.1 狂犬病概况 | 第13-16页 |
| 1.1.1 狂犬病病毒分子特征 | 第13-14页 |
| 1.1.2 狂犬病的流行与传播 | 第14-15页 |
| 1.1.3 犬用狂犬病疫苗现状 | 第15-16页 |
| 1.2 犬瘟热概况 | 第16-18页 |
| 1.2.1 犬瘟热病毒分子生物学特征 | 第16-17页 |
| 1.2.2 犬瘟热疫苗现状 | 第17页 |
| 1.2.3 犬瘟热病毒反向遗传技术的发展 | 第17-18页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第18-20页 |
| 第二章 犬瘟热病毒Snyder Hill株反向遗传操作系统的建立 | 第20-28页 |
| 2.1 材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 病毒株、细胞和质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂与仪器 | 第20页 |
| 2.1.3 引物设计与合成 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-23页 |
| 2.2.1 CDV Snyder Hill株病毒基因组的提取、反转录和PCR | 第21页 |
| 2.2.2 CDV Snyder Hill株全基因组测序 | 第21页 |
| 2.2.3 CDV Snyder Hill株基因序列拼接与H基因序列分析 | 第21-22页 |
| 2.2.4 CDV Snyder Hill株病毒基因组全长cDNA克隆的构建 | 第22页 |
| 2.2.5 CDV Snyder Hill株辅助质粒的构建 | 第22页 |
| 2.2.6 CDV Snyder Hill株病毒拯救 | 第22页 |
| 2.2.7 拯救病毒的鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.7.1 RT-PCR鉴定 | 第22页 |
| 2.2.7.2 间接免疫荧光(IFA)鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.7.3 Western Bloting鉴定 | 第23页 |
| 2.2.8 种毒制备与病毒滴定 | 第23页 |
| 2.2.9 病毒生长动力学曲线的测定 | 第23页 |
| 2.3 结果 | 第23-27页 |
| 2.3.1 CDV Snyder Hill疫苗株H基因同源性分析 | 第23-24页 |
| 2.3.2 CDV Snyder Hill株基因组全长cDNA克隆及其辅助质粒构建 | 第24-25页 |
| 2.3.3 CDV Snyder Hill株病毒拯救与鉴定 | 第25-26页 |
| 2.3.3.1 RT-PCR | 第25页 |
| 2.3.3.2 IFA | 第25-26页 |
| 2.3.3.3 Western Bloting | 第26页 |
| 2.3.4 rCDV病毒生长曲线的测定 | 第26-27页 |
| 2.4 讨论 | 第27-28页 |
| 第三章 表达绿色荧光蛋白(EGFP)重组犬瘟热病毒Snyder Hill疫苗株的构建及其生物学特性研究 | 第28-34页 |
| 3.1 材料 | 第28页 |
| 3.1.1 病毒、细胞和质粒 | 第28页 |
| 3.1.2 主要试剂及仪器 | 第28页 |
| 3.1.3 引物的设计与合成 | 第28页 |
| 3.2 方法 | 第28-30页 |
| 3.2.1 表达EGFP的重组CDV Snyder Hill株病毒基因组cDNA克隆的构建 | 第28-29页 |
| 3.2.2 表达EGFP外源基因的重组病毒的拯救 | 第29页 |
| 3.2.3 重组病毒rCDV-EGFP的鉴定 | 第29页 |
| 3.2.3.1 RT-PCR鉴定 | 第29页 |
| 3.2.3.2 IFA鉴定 | 第29页 |
| 3.2.3.3 Western Bloting鉴定 | 第29页 |
| 3.2.4 重组病毒rCDV-EGFP生长曲线的测定 | 第29页 |
| 3.2.5 rCDV-EGFP病毒遗传稳定性的检测 | 第29-30页 |
| 3.3 结果 | 第30-33页 |
| 3.3.1 表达EGFP重组CDV Snyder Hill株病毒基因组全长cDNA克隆构建 | 第30页 |
| 3.3.2 表达EGFP外源基因的重组犬瘟热病毒的拯救 | 第30-31页 |
| 3.3.3 重组病毒rCDV-EGFP的鉴定 | 第31-32页 |
| 3.3.3.1 RT-PCR | 第31页 |
| 3.3.3.2 IFA | 第31页 |
| 3.3.3.3 Western Bloting | 第31-32页 |
| 3.3.4 重组病毒rCDV-EGFP体外生长特性 | 第32页 |
| 3.3.5 rCDV-EGFP遗传稳定性检测 | 第32-33页 |
| 3.4 讨论 | 第33-34页 |
| 第四章 表达狂犬病病毒G蛋白(RVG)重组犬瘟热病毒Snyder Hill疫苗株的构建及其生物学特性与免疫原性研究 | 第34-41页 |
| 4.1 材料 | 第34页 |
| 4.1.1 病毒、细胞、质粒和实验动物 | 第34页 |
| 4.1.2 主要试剂及仪器 | 第34页 |
| 4.1.3 引物的设计与合成 | 第34页 |
| 4.2 方法 | 第34-36页 |
| 4.2.1 表达RVG的重组CDV Snyder Hill株病毒基因组cDNA克隆的构建 | 第34-35页 |
| 4.2.2 表达RVG的重组病毒的拯救 | 第35页 |
| 4.2.3 重组病毒rCDV-RVG的鉴定 | 第35页 |
| 4.2.3.1 RT-PCR鉴定 | 第35页 |
| 4.2.3.2 IFA鉴定 | 第35页 |
| 4.2.3.3 Western Bloting鉴定 | 第35页 |
| 4.2.4 重组病毒rCDV-RVG生长曲线的测定 | 第35页 |
| 4.2.5 重组病毒rCDV-RVG免疫比格犬 | 第35-36页 |
| 4.2.6 中和试验 | 第36页 |
| 4.3 结果 | 第36-39页 |
| 4.3.1 表达RVG重组CDV Snyder Hill株病毒基因组全长cDNA克隆构建 | 第36页 |
| 4.3.2 重组病毒rCDV-RVG的鉴定结果 | 第36-38页 |
| 4.3.2.1 RT-PCR | 第36-37页 |
| 4.3.2.2 IFA | 第37页 |
| 4.3.2.3 Western Bloting | 第37-38页 |
| 4.3.3 重组病毒rCDV-RVG体外生长特性 | 第38页 |
| 4.3.4 重组病毒rCDV-RVG对犬的免疫效力 | 第38-39页 |
| 4.4 讨论 | 第39-41页 |
| 第五章 全文结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-48页 |
| 附录 | 第48-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简历 | 第56页 |
