| 缩略语表 | 第7-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 前言 | 第16-18页 |
| 文献回顾 | 第18-41页 |
| 1 结肠和结肠癌 | 第18-24页 |
| 1.1 结肠组织结构和结肠干细胞 | 第18-20页 |
| 1.2 肠上皮分化发育调节 | 第20-21页 |
| 1.3 结肠癌 | 第21-24页 |
| 1.3.1 结肠癌的发病率 | 第21页 |
| 1.3.2 结肠癌的分子异常 | 第21-23页 |
| 1.3.3 炎症微环境与结肠癌 | 第23-24页 |
| 2 肿瘤干细胞 | 第24-33页 |
| 2.1 肿瘤干细胞生物学特性 | 第25页 |
| 2.2 肿瘤干细胞的起源 | 第25-26页 |
| 2.2.1 成体干细胞来源 | 第25页 |
| 2.2.2 定向祖细胞的转化 | 第25-26页 |
| 2.3 肿瘤干细胞表面标志分子 | 第26页 |
| 2.4 肿瘤干细胞的分离鉴定 | 第26-27页 |
| 2.4.1 肿瘤干细胞的分选 | 第26-27页 |
| 2.4.2 肿瘤干细胞的鉴定 | 第27页 |
| 2.5 肿瘤干细胞的信号转导通路 | 第27-30页 |
| 2.5.1 Wnt信号通路 | 第28页 |
| 2.5.2 Notch信号通路 | 第28页 |
| 2.5.3 Hedgehog信号通路 | 第28-29页 |
| 2.5.4 TGFβ/BMP信号通路 | 第29页 |
| 2.5.5 PTEN | 第29页 |
| 2.5.6 JAK-STAT信号通路 | 第29-30页 |
| 2.5.7 NF-κB和STAT3信号通路 | 第30页 |
| 2.6 肿瘤干细胞微环境 | 第30-31页 |
| 2.6.1 缺氧微环境 | 第30-31页 |
| 2.6.2 血管微环境 | 第31页 |
| 2.6.3 炎性微环境 | 第31页 |
| 2.7 肿瘤干细胞治疗 | 第31-32页 |
| 2.8 肿瘤干细胞研究中存在的问题及展望 | 第32-33页 |
| 3 结肠癌干细胞 | 第33-36页 |
| 3.1 结肠癌干细胞标志分子 | 第33-34页 |
| 3.2 结肠癌干细胞分子异常 | 第34-35页 |
| 3.3 肿瘤微环境与肿瘤干细胞的异质性 | 第35页 |
| 3.4 炎症微环境与结肠癌干细胞 | 第35-36页 |
| 4 Rab蛋白家族 | 第36-38页 |
| 4.1 Rab蛋白家族简介 | 第36页 |
| 4.2 Rab GTPase活性调节 | 第36-37页 |
| 4.3 Rab蛋白与囊泡定位的关系 | 第37页 |
| 4.4 Rab蛋白与疾病的关系 | 第37-38页 |
| 4.5 Rab蛋白与肿瘤的关系 | 第38页 |
| 5 Rab27A | 第38-41页 |
| 5.1 Rab27A蛋白简介 | 第38-39页 |
| 5.2 Rab27A蛋白与疾病 | 第39-40页 |
| 5.3 Rab27A蛋白与肿瘤 | 第40-41页 |
| 实验一 Rab27A在结肠癌和结肠癌干细胞中的表达变化 | 第41-56页 |
| 引言 | 第41页 |
| 1 材料 | 第41-43页 |
| 1.1 实验材料 | 第41页 |
| 1.2 主要试剂 | 第41-42页 |
| 1.3 主要仪器 | 第42-43页 |
| 2 方法 | 第43-48页 |
| 2.1 免疫组化染色 | 第43-44页 |
| 2.2 细胞培养 | 第44页 |
| 2.3 Real Time-PCR | 第44-46页 |
| 2.4 免疫印迹 | 第46-47页 |
| 2.5 免疫荧光染色和流式细胞术（FCM）分析 | 第47-48页 |
| 2.6 PKH26染色和流式检测 | 第48页 |
| 3 结果 | 第48-53页 |
| 3.1 Rab27A在人结肠癌组织和细胞系中的差异表达 | 第48-49页 |
| 3.2 6 株不同结肠癌细胞系干性分析 | 第49-50页 |
| 3.3 HT29结肠癌干细胞干性分析 | 第50-52页 |
| 3.4 HT29结肠癌传代干细胞干性分析 | 第52-53页 |
| 3.5 Rab27A在HT29结肠癌干细胞中的表达变化 | 第53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| 实验二 Rab27A表达异常对结肠肿瘤干细胞干性的影响 | 第56-71页 |
| 引言 | 第56页 |
| 1 材料 | 第56-57页 |
| 1.1 实验材料 | 第56页 |
| 1.2 主要试剂 | 第56-57页 |
| 1.3 主要仪器 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-59页 |
| 2.1 载体构建 | 第57-58页 |
| 2.2 慢病毒包装 | 第58页 |
| 2.3 慢病毒感染和稳转细胞系的建立 | 第58页 |
| 2.4 细胞周期检测 | 第58-59页 |
| 2.5 PKH26染色和检测 | 第59页 |
| 2.6 si RNA转染 | 第59页 |
| 3 结果 | 第59-69页 |
| 3.1 Rab27A促进结肠癌干细胞球体的形成数目和体积 | 第59-61页 |
| 3.2 Rab27A促进结肠癌传代干细胞的增殖 | 第61-63页 |
| 3.3 Rab27A增加结肠癌细胞中CD44+细胞比例 | 第63-64页 |
| 3.4 Rab27A增加结肠癌细胞中PKH26high细胞比例 | 第64-66页 |
| 3.5 Rab27A提高结肠癌干细胞中S期细胞比例 | 第66-69页 |
| 4 讨论 | 第69-71页 |
| 实验三 Rab27A表达异常对结肠癌干细胞的细胞因子分泌的影响 | 第71-79页 |
| 引言 | 第71页 |
| 1 材料 | 第71-72页 |
| 1.1 实验材料 | 第71页 |
| 1.2 主要试剂 | 第71-72页 |
| 2 方法 | 第72-73页 |
| 2.1 载体构建 | 第72页 |
| 2.2 结肠癌干细胞条件培养 | 第72页 |
| 2.3 ELISA | 第72-73页 |
| 3 结果 | 第73-77页 |
| 3.1 Rab27A过表达sphere培养上清促进结肠癌干细胞的增殖 | 第73-74页 |
| 3.2 Rab27A促进结肠癌干细胞VEGF和TGF-β 的分泌 | 第74页 |
| 3.3 Rab27A在结肠癌HT29细胞中的定位 | 第74-75页 |
| 3.4 Rab27A与结肠肿瘤干细胞的定位 | 第75-77页 |
| 4 讨论 | 第77-79页 |
| 实验四 Rab27A表达异常对结肠肿瘤干细胞在免疫缺陷小鼠体内生长的影响 | 第79-85页 |
| 引言 | 第79页 |
| 1 材料 | 第79-80页 |
| 1.1 实验材料 | 第79页 |
| 1.2 主要试剂 | 第79-80页 |
| 1.3 主要仪器 | 第80页 |
| 2 方法 | 第80-81页 |
| 2.1 HT29结肠癌荷瘤小鼠模型的建立 | 第80页 |
| 2.2 生物标本的制备 | 第80页 |
| 2.3 CD31免疫组化染色及血管计数 | 第80-81页 |
| 3 结果 | 第81-83页 |
| 3.1 Rab27A促进结肠癌肿瘤干细胞在裸鼠体内的生长 | 第81-82页 |
| 3.2 Rab27A促进结肠癌肿瘤血管生成 | 第82-83页 |
| 4 讨论 | 第83-85页 |
| 实验五 Rab27A的表达受转录因子NF-κB调控 | 第85-98页 |
| 引言 | 第85页 |
| 1 材料 | 第85-86页 |
| 1.1 实验材料 | 第85页 |
| 1.2 主要试剂 | 第85-86页 |
| 1.3 主要仪器 | 第86页 |
| 2 方法 | 第86-88页 |
| 2.1 载体构建 | 第86-87页 |
| 2.2 NF-κB双荧光素酶报告系统 | 第87页 |
| 2.3 Rab27A启动子双荧光素酶报告系统 | 第87-88页 |
| 3 结果 | 第88-96页 |
| 3.1 HT29结肠癌干细胞中NF-κB信号通路活性升高 | 第88-89页 |
| 3.2 p65上调Rab27A的表达 | 第89-90页 |
| 3.3 p65调控Rab27A启动子转录活性 | 第90-92页 |
| 3.4 TNFα 促进HT29结肠肿瘤干细胞的生长 | 第92-93页 |
| 3.5 TNFα 促进HT29结肠肿瘤干细胞的干性 | 第93-95页 |
| 3.6 TNFα 介导的NF-κB信号通路活化使Rab27A表达升高 | 第95-96页 |
| 4 讨论 | 第96-98页 |
| 小结 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-108页 |
| 附件 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
