| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10页 |
| 第一章 引言 | 第11-25页 |
| 1 稻瘟病和稻瘟病菌概述 | 第11-16页 |
| 1.1 稻瘟病和稻瘟病菌 | 第11页 |
| 1.2 稻瘟病菌生活史及侵染循环 | 第11-12页 |
| 1.3 稻瘟病菌信号转导途径 | 第12-16页 |
| 1.3.1 cAMP信号途径 | 第12-13页 |
| 1.3.2 MAPK信号途径 | 第13-14页 |
| 1.3.3 细胞壁完整性MAPK途径及钙离子信号途径 | 第14-15页 |
| 1.3.4 渗透调节途径及胁迫反应 | 第15页 |
| 1.3.5 植物侵染过程中细胞骨架的动力组织化 | 第15页 |
| 1.3.6 ROS与致病性 | 第15-16页 |
| 1.3.7 效应子递送机制 | 第16页 |
| 2 Dock180与Elmo1 | 第16-23页 |
| 2.1 Rho蛋白 | 第16-17页 |
| 2.2 调控Rho蛋白的两类GEF | 第17页 |
| 2.3 Dock家族及结构特点 | 第17-19页 |
| 2.4 Elmo家族蛋白及结构特点 | 第19页 |
| 2.5 Dock180/Elmo复合体及二元GEF模式 | 第19-21页 |
| 2.6 募集Dock180/Elmo复合体到质膜的机制 | 第21-22页 |
| 2.7 Dock180的泛素化 | 第22页 |
| 2.8 Dock180和Elmo的磷酸化 | 第22页 |
| 2.9 Dock180与PtdIns(3,4,5)P3 | 第22-23页 |
| 2.10 Dock180与Elmo的研究趋势 | 第23页 |
| 3 研究稻瘟病菌中Dock180与Elmo同源蛋白的意义 | 第23-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-36页 |
| 1 实验材料 | 第25-26页 |
| 1.1 供试菌株 | 第25页 |
| 1.2 供试植物 | 第25页 |
| 1.3 常用培养基及配方(以配制1L计) | 第25-26页 |
| 1.4 抗生素 | 第26页 |
| 1.5 生化试剂 | 第26页 |
| 2 实验方法 | 第26-36页 |
| 2.1 稻瘟病菌中Dock180和Elmo1同源蛋白的生物信息学分析 | 第26-27页 |
| 2.1.1 稻瘟病菌中Dock180和Elmo1同源蛋白序列的获得 | 第26-27页 |
| 2.1.2 稻瘟病菌中Dock180和Elmo1同源蛋白结构域及其理化性质分析 | 第27页 |
| 2.1.3 8种物种中Dock180和Elmo1蛋白主要结构域序列的同源性比对 | 第27页 |
| 2.2 供试载体的构建 | 第27-29页 |
| 2.2.1 引物设计与PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.2 PCR产物回收 | 第28页 |
| 2.2.3 PCR产物的TA克隆 | 第28页 |
| 2.2.4 质粒的提取 | 第28页 |
| 2.2.5 质粒的酶切与连接 | 第28-29页 |
| 2.2.6 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备及转化 | 第29页 |
| 2.3 稻瘟病菌目的基因的敲除 | 第29-31页 |
| 2.3.1 稻瘟病菌基因敲除原理 | 第29页 |
| 2.3.2 MoDock1基因敲除载体的构建 | 第29页 |
| 2.3.3 MoElmo1基因敲除载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.3.4 稻瘟病菌原生质体的制备和转化 | 第30页 |
| 2.3.5 稻瘟病菌基因组DNA的粗提 | 第30-31页 |
| 2.3.6 Southern杂交 | 第31页 |
| 2.4 稻瘟病菌cDNA的制备 | 第31-32页 |
| 2.4.1 稻瘟病菌RNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.4.2 逆转录RT-PCR | 第32页 |
| 2.5 酵母双杂 | 第32-34页 |
| 2.5.1 酵母双杂所用培养基 | 第32-33页 |
| 2.5.2 酵母细胞感受态的制备及转化 | 第33-34页 |
| 2.6 稻瘟病菌表型分析 | 第34-36页 |
| 2.6.1 稻瘟病菌菌落形态观察及生长速率测定 | 第34页 |
| 2.6.2 稻瘟病菌产孢量统计 | 第34页 |
| 2.6.3 稻瘟病菌分生孢子粘着实验 | 第34页 |
| 2.6.4 稻瘟病菌分生孢子附着胞形成率统计及隔膜观察 | 第34-35页 |
| 2.6.5 稻瘟病菌附着胞膨压实验 | 第35页 |
| 2.6.6 洋葱表皮侵染实验 | 第35页 |
| 2.6.7 稻瘟病菌细胞壁敏感性分析 | 第35页 |
| 2.6.8 稻瘟病菌有性生殖实验 | 第35页 |
| 2.6.9 水稻致病性鉴定 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-55页 |
| 1 稻瘟病菌Dock180、Elmo1同源蛋白的鉴定与同源性分析 | 第36-37页 |
| 2 MoDock1与MoElmo1基因缺失突变体的筛选与验证 | 第37-40页 |
| 2.1 PCR扩增初筛 | 第38页 |
| 2.2 RT-PCR验证 | 第38页 |
| 2.3 Southern blot验证 | 第38-40页 |
| 3 MoDock1与MoElmo1基因缺失突变体的表型分析 | 第40-55页 |
| 3.1 MoDock1和MoElmo1的缺失微弱影响稻瘟病菌的营养生长 | 第40-41页 |
| 3.2 MoDock1和MoElmo1的缺失不影响稻瘟病菌的产孢 | 第41页 |
| 3.3 MoDock1和MoElmo1的缺失影响分生孢子的粘着 | 第41-42页 |
| 3.4 MoDock1和MoElmo1缺失影响附着胞的发育 | 第42-48页 |
| 3.4.1 MoDock1和MoElmo1的缺失导致芽管异常,附着胞发育延缓 | 第42-45页 |
| 3.4.2 MoDock1和MoElmo1与稻瘟病菌cAMP途径相关 | 第45-46页 |
| 3.4.3 MoDock1和MoElmo1的缺失导致附着胞发育过程出现分隔紊乱,cAMP能修复这种缺陷 | 第46-48页 |
| 3.5 MoDock1和MoElmo1的缺失影响附着胞的侵染率 | 第48-49页 |
| 3.6 MoDock1和MoElmo1的缺失不影响附着胞的膨压 | 第49-50页 |
| 3.8 MoDock1和MoElmo1的缺失导致稻瘟病菌致病性下降 | 第50-52页 |
| 3.9 MoDock1和MoElmo1的缺失不影响稻瘟病菌的有性生殖 | 第52-53页 |
| 3.10 MoDock1和MoElmo1缺失对细胞壁完整性的影响 | 第53页 |
| 3.11 MoDock1与MoElmol、MoRac1关系的探究 | 第53-55页 |
| 第四章 讨论 | 第55-58页 |
| 参考文献 | 第58-67页 |
| 附录 | 第67-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
