| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-26页 |
| 1.1 果糖基转移酶 | 第12-14页 |
| 1.1.1 果糖基转移酶简介 | 第12-13页 |
| 1.1.2 果糖基转移酶性质的研究 | 第13页 |
| 1.1.3 果糖基转移酶基因的研究 | 第13-14页 |
| 1.2 大肠杆菌表达系统 | 第14-18页 |
| 1.2.1 大肠杆菌的生物学特性 | 第14-16页 |
| 1.2.2 外源蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第16页 |
| 1.2.3 影响外源基因在大肠杆菌中表达的因素 | 第16-18页 |
| 1.3 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第18-23页 |
| 1.3.1 毕赤酵母的生物学特性 | 第18-19页 |
| 1.3.2 外源蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第19-22页 |
| 1.3.3 影响外源基因在毕赤酵母中表达的因素 | 第22-23页 |
| 1.4 研究意义 | 第23-24页 |
| 1.5 研究背景 | 第24-25页 |
| 1.6 研究内容 | 第25-26页 |
| 第二章 米曲霉果糖基转移酶基因的克隆 | 第26-46页 |
| 引言 | 第26-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-31页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第28页 |
| 2.1.2 生化试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.3 主要实验设备 | 第29-30页 |
| 2.1.4 培养基与常用缓冲液 | 第30页 |
| 2.1.5 实验引物 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-38页 |
| 2.2.1 米曲霉总 RNA 提取 | 第31-32页 |
| 2.2.2 米曲霉 cDNA 合成 | 第32-33页 |
| 2.2.3 果糖基转移酶基因扩增 | 第33-34页 |
| 2.2.4 果糖基转移酶基因分离纯化 | 第34-35页 |
| 2.2.5 果糖基转移酶基因克隆质粒构建 | 第35-36页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第36页 |
| 2.2.7 克隆质粒转化大肠杆菌 | 第36-37页 |
| 2.2.8 大肠杆菌转化子筛选及验证 | 第37-38页 |
| 2.3 结果与结论 | 第38-45页 |
| 2.3.1 米曲霉总 RNA 电泳验证 | 第38-39页 |
| 2.3.2 果糖基转移酶基因扩增 | 第39-40页 |
| 2.3.3 大肠杆菌克隆转化子抗性筛选 | 第40-41页 |
| 2.3.4 大肠杆菌克隆转化子 PCR 验证 | 第41-42页 |
| 2.3.5 大肠杆菌克隆载体验证 | 第42页 |
| 2.3.6 大肠杆菌克隆子测序结果分析 | 第42-45页 |
| 2.4 本章小结 | 第45-46页 |
| 第三章 米曲霉果糖基转移酶原核重组表达 | 第46-63页 |
| 引言 | 第46-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第47页 |
| 3.1.2 生化试剂 | 第47页 |
| 3.1.3 主要实验设备 | 第47页 |
| 3.1.4 培养基与常用缓冲液 | 第47-48页 |
| 3.2 实验方法 | 第48-55页 |
| 3.2.1 果糖基转移酶基因扩增 | 第48-49页 |
| 3.2.2 果糖基转移酶基因原核表达载体构建 | 第49-50页 |
| 3.2.3 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第50页 |
| 3.2.4 原核表达质粒转化大肠杆菌 | 第50页 |
| 3.2.5 大肠杆菌表达转化子抗性筛选及验证 | 第50-51页 |
| 3.2.6 重组果糖基转移酶在大肠杆菌中诱导表达 | 第51页 |
| 3.2.7 重组果糖基转移酶原核表达结果检测 | 第51-53页 |
| 3.2.8 重组果糖基转移酶纯化及鉴定 | 第53-54页 |
| 3.2.9 大肠杆菌表达重组子酶活力测定 | 第54-55页 |
| 3.3 结果与结论 | 第55-62页 |
| 3.3.1 大肠杆菌表达转化子抗性筛选 | 第55-56页 |
| 3.3.2 大肠杆菌表达转化子 PCR 验证 | 第56页 |
| 3.3.3 果糖基转移酶基因原核表达载体验证 | 第56-57页 |
| 3.3.4 大肠杆菌表达转化子诱导条件优化 | 第57-59页 |
| 3.3.5 重组果糖基转移酶纯化 | 第59-60页 |
| 3.3.6 重组果糖基转移酶蛋白质谱检测 | 第60页 |
| 3.3.7 大肠杆菌表达转化子酶活力检测 | 第60-62页 |
| 3.4 本章小结 | 第62-63页 |
| 第四章 米曲霉果糖基转移酶基因的真核表达 | 第63-75页 |
| 引言 | 第63-64页 |
| 4.1 实验材料 | 第64-65页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第64页 |
| 4.1.2 生化试剂 | 第64页 |
| 4.1.3 培养基与常用缓冲液 | 第64-65页 |
| 4.2 实验方法 | 第65-69页 |
| 4.2.1 果糖基转移酶真核表达载体构建 | 第65-66页 |
| 4.2.2 毕赤酵母电转感受态细胞制备 | 第66-67页 |
| 4.2.3 重组真核表达载体转化毕赤酵母 | 第67页 |
| 4.2.4 重组毕赤酵母抗性筛选及验证 | 第67-68页 |
| 4.2.5 重组果糖基转移酶在毕赤酵母中诱导表达 | 第68页 |
| 4.2.6 果糖基转移酶在毕赤酵母中表达鉴定 | 第68页 |
| 4.2.7 毕赤酵母表达转化子发酵上清液酶活力检测 | 第68-69页 |
| 4.3 结果与结论 | 第69-74页 |
| 4.3.1 果糖基转移酶真核表达载体构建 | 第69-72页 |
| 4.3.2 毕赤酵母表达转化子抗性筛选及验证 | 第72-73页 |
| 4.3.3 重组果糖基转移酶基因在毕赤酵母中诱导表达 | 第73页 |
| 4.3.4 毕赤酵母表达转化子发酵上清液酶活检测 | 第73-74页 |
| 4.4 本章小结 | 第74-75页 |
| 结论 | 第75-77页 |
| 展望 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-85页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 附件 | 第87页 |