| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-15页 |
| 1.1 选题来源 | 第9页 |
| 1.2 天冬氨酸激酶的研究概况 | 第9-12页 |
| 1.2.1 天冬氨酸激酶的来源 | 第9页 |
| 1.2.2 天冬氨酸激酶的调节机制 | 第9-10页 |
| 1.2.3 天冬氨酸激酶的结构 | 第10-11页 |
| 1.2.4 天冬氨酸激酶的应用研究 | 第11-12页 |
| 1.3 天冬氨酸激酶的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3.1 AK 的国外研究进展 | 第12页 |
| 1.3.2 AK 的国内研究进展 | 第12-13页 |
| 1.4 定点突变技术和高通量筛选技术 | 第13页 |
| 1.5 研究内容 | 第13-14页 |
| 1.6 本研究的目的、意义和创新点 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-25页 |
| 2.1 试验材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第16-17页 |
| 2.2 试验方法 | 第17-25页 |
| 2.2.1 突变位点的确定 | 第17-18页 |
| 2.2.2 质粒 pET-28a-AK 的提取 | 第18页 |
| 2.2.3 定点突变 | 第18-19页 |
| 2.2.4 E. coli BL21 感受态细胞的制备及突变质粒转化 | 第19页 |
| 2.2.5 突变株筛选 | 第19-20页 |
| 2.2.6 AK 基因验证、诱导及粗酶液制备 | 第20页 |
| 2.2.7 AK 蛋白纯化 | 第20-21页 |
| 2.2.8 SDS-PAGE | 第21-22页 |
| 2.2.9 蛋白印迹 | 第22页 |
| 2.2.10 蛋白质含量测定 | 第22-23页 |
| 2.2.11 AK 酶活力测定和动力学分析 | 第23-24页 |
| 2.2.12 AK 酶学性质研究 | 第24-25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-34页 |
| 3.1 突变位点的确定 | 第25-26页 |
| 3.2 突变株 AK 基因验证 | 第26页 |
| 3.3 AK 蛋白的 SDS-PAGE 和 Western blot | 第26-27页 |
| 3.4 酶动力学研究 | 第27-28页 |
| 3.5 酶学性质表征 | 第28-34页 |
| 3.5.1 最适 pH 和最适温度 | 第28-30页 |
| 3.5.2 热稳定性 | 第30页 |
| 3.5.3 金属离子、有机溶剂和抑制剂对野生型和突变株 AK 酶活力的影响 | 第30-34页 |
| 4 讨论 | 第34-37页 |
| 4.1 T361K AK、T361N AK | 第34-35页 |
| 4.2 A362I AK | 第35-37页 |
| 5 结论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-42页 |
| 作者简介 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43页 |
