| 缩略语表 | 第3-6页 |
| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 综述 | 第18-40页 |
| 1.1 间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)概述 | 第18-19页 |
| 1.1.1 MSCs的鉴定特征 | 第18页 |
| 1.1.2 MSCs的生物学功能特性 | 第18-19页 |
| 1.2 MSCs治疗肝病的研究综述 | 第19-29页 |
| 1.2.1 人的肝病动物模型 | 第20-25页 |
| 1.2.2 MSCs用于慢性肝病治疗的临床研究的意义与存在的问题 | 第25-28页 |
| 1.2.3 利用人类肝病动物模型开展MSCs治疗的临床前研究的意义 | 第28-29页 |
| 1.3 MSCs治疗骨关节炎的研究综述 | 第29-35页 |
| 1.3.1 骨关节炎病理学 | 第29-30页 |
| 1.3.2 目前治疗骨关节炎的技术 | 第30-32页 |
| 1.3.3 MSCs对骨关节炎软骨的修复研究 | 第32-35页 |
| 1.3.4 MSCs治疗骨关节炎的安全性 | 第35页 |
| 1.4 MSCs的冷冻保存研究综述 | 第35-40页 |
| 1.4.1 影响MSCs冻存效率的因素 | 第35-36页 |
| 1.4.2 MSCs的常规冻存方法 | 第36页 |
| 1.4.3 MSCs常规冻存方法优化 | 第36-40页 |
| 第二章 猕猴骨髓MSCs的分离与鉴定 | 第40-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第40-42页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第40页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第40-41页 |
| 2.1.3 实验仪器和耗材 | 第41-42页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第42页 |
| 2.2 实验方法 | 第42-48页 |
| 2.2.1 MSCs的分离 | 第43-44页 |
| 2.2.2 MSCs的传代和纯化 | 第44页 |
| 2.2.3 MSCs的冻存与复苏 | 第44-45页 |
| 2.2.4 MSCs表面分子鉴定 | 第45-46页 |
| 2.2.5 MSCs的多向分化能力检测化 | 第46-48页 |
| 2.3 实验结果 | 第48-51页 |
| 2.3.1 MSCs形态学观察 | 第48页 |
| 2.3.2 MSCs表面分子检测 | 第48-50页 |
| 2.3.3 MSCs分化潜能鉴定 | 第50-51页 |
| 2.4 讨论 | 第51-54页 |
| 第三章 猕猴骨髓和脂肪来源的MSCs体外肝向分化比较 | 第54-68页 |
| 3.1 实验材料 | 第54-56页 |
| 3.1.1 细胞系 | 第54-55页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第55页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第55页 |
| 3.1.4 主要试剂配制 | 第55-56页 |
| 3.2 实验方法 | 第56-60页 |
| 3.2.1 MSCs体外诱导肝向分化 | 第56页 |
| 3.2.2 猕猴肝细胞的分离 | 第56-57页 |
| 3.2.3 糖原染色 | 第57页 |
| 3.2.4 尿素检测 | 第57-58页 |
| 3.2.5 RNA提取 | 第58页 |
| 3.2.6 荧光定量PCR检测 | 第58-60页 |
| 3.3 实验结果 | 第60-65页 |
| 3.3.1 细胞形态改变 | 第60-61页 |
| 3.3.2 糖原累积 | 第61-62页 |
| 3.3.3 尿素合成 | 第62-63页 |
| 3.3.4 肝细胞特异基因表达 | 第63-65页 |
| 3.4 讨论 | 第65-68页 |
| 第四章 GFP和新型超顺磁纳米铁标记猕猴骨髓MSCs | 第68-82页 |
| 4.1 实验材料 | 第69页 |
| 4.1.1 细胞系 | 第69页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第69页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第69页 |
| 4.1.4 主要试剂配制 | 第69页 |
| 4.2 实验方法 | 第69-72页 |
| 4.2.1 质粒提取 | 第70页 |
| 4.2.2 慢病毒包装与感染 | 第70页 |
| 4.2.3 稳定标记GFP的MSCs筛选 | 第70-71页 |
| 4.2.4 分化潜能鉴定 | 第71页 |
| 4.2.5 pCDH、psPAX2和pMD2.G质粒图谱 | 第71-72页 |
| 4.2.6 Molday ION Rhodamine B(MIRB)标记 | 第72页 |
| 4.2.7 普鲁士蓝染色 | 第72页 |
| 4.3 实验结果 | 第72-80页 |
| 4.3.1 慢病毒成功包装 | 第72-73页 |
| 4.3.2 GFP成功标记MSCs | 第73页 |
| 4.3.3 GFP的高效标记 | 第73-74页 |
| 4.3.4 GFP标记后不影响MSCs分化 | 第74-75页 |
| 4.3.5 新型超顺磁纳米颗粒(MIRB)的高效标记 | 第75-76页 |
| 4.3.6 MIRB标记后普鲁士蓝检测 | 第76-77页 |
| 4.3.7 MIRB标记后增殖检测 | 第77-78页 |
| 4.3.8 MIRB标记后不影响MSCs分化 | 第78-80页 |
| 4.4 讨论 | 第80-82页 |
| 第五章 猕猴骨髓MSCs移植治疗CCl_4诱导的肝纤维小鼠和DMNA诱导的肝纤维猕猴的研究 | 第82-116页 |
| 5.1 实验材料 | 第82-84页 |
| 5.1.1 实验动物 | 第82-83页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第83页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第83-84页 |
| 5.1.4 主要试剂配制 | 第84页 |
| 5.2 实验方法 | 第84-90页 |
| 5.2.1 纤维化动物模型的制备 | 第84-85页 |
| 5.2.2 血液采集及血清分离 | 第85页 |
| 5.2.3 病理切片及染色 | 第85-86页 |
| 5.2.4 MSCs移植 | 第86-87页 |
| 5.2.5 组织RNA提取 | 第87-88页 |
| 5.2.6 组织DNA提取 | 第88-89页 |
| 5.2.7 PCR扩增 | 第89页 |
| 5.2.8 冰冻切片及免疫荧光 | 第89页 |
| 5.2.9 肝穿刺 | 第89-90页 |
| 5.2.10 核磁共振成像 | 第90页 |
| 5.3 实验结果 | 第90-112页 |
| 5.3.1 CCl_4成功诱导小鼠肝纤维化模型 | 第90-93页 |
| 5.3.2 猕猴骨髓MSCs改善了小鼠的肝纤维化 | 第93-97页 |
| 5.3.3 移植MSCs后在小鼠肝脏组织的定植情况 | 第97-99页 |
| 5.3.4 DMNA诱导猕猴肝纤维化模型 | 第99-102页 |
| 5.3.5 猕猴骨髓MSCs改善了猕猴的肝纤维化 | 第102-112页 |
| 5.3.6 移植MSCs后在猕猴肝组织中的定植情况 | 第112页 |
| 5.4 讨论 | 第112-116页 |
| 5.4.1 猕猴骨髓MSCs改善CCl_4诱导的小鼠肝纤维化模型 | 第112-114页 |
| 5.4.2 猕猴骨髓MSCs改善DMNA诱导的猕猴肝纤维化模型 | 第114-116页 |
| 第六章 猕猴骨髓MSCs治疗自发性猕猴骨关节炎的研究 | 第116-136页 |
| 6.1 实验材料 | 第117页 |
| 6.1.1 实验动物 | 第117页 |
| 6.1.2 实验试剂 | 第117页 |
| 6.1.3 实验仪器 | 第117页 |
| 6.2 实验方法 | 第117-119页 |
| 6.2.1 骨关节炎的视觉评价 | 第117-118页 |
| 6.2.2 关节大小测量 | 第118页 |
| 6.2.3 腿部伸直度测量 | 第118页 |
| 6.2.4 血清学指标检测 | 第118页 |
| 6.2.5 X光检测 | 第118页 |
| 6.2.6 核磁共振检测 | 第118页 |
| 6.2.7 运动行为分析 | 第118-119页 |
| 6.2.8 MSCs的移植 | 第119页 |
| 6.3 结果 | 第119-132页 |
| 6.3.1 移植MSCs前后的视觉评价 | 第119-120页 |
| 6.3.2 移植MSCs后关节大小改善 | 第120-121页 |
| 6.3.3 移植MSCs后腿伸直度改善 | 第121-122页 |
| 6.3.4 移植MSCs后血清指标变化 | 第122-123页 |
| 6.3.5 X光分析骨关节炎的改善 | 第123-126页 |
| 6.3.6 核磁共振分析骨关节炎的改善 | 第126-129页 |
| 6.3.7 移植MSCs后运动行为改善 | 第129-132页 |
| 6.4 讨论 | 第132-136页 |
| 第七章 DMSO和EG玻璃化冻存对猕猴骨髓MSCs的生物学特性影响 | 第136-174页 |
| 7.1 实验材料 | 第137-138页 |
| 7.1.1 细胞系 | 第137页 |
| 7.1.2 实验试剂 | 第137页 |
| 7.1.3 实验仪器 | 第137-138页 |
| 7.1.4 主要试剂配制 | 第138页 |
| 7.2 实验方法 | 第138-146页 |
| 7.2.1 玻璃化冻存 | 第138-140页 |
| 7.2.2 细胞复苏 | 第140页 |
| 7.2.3 细胞存活率检测 | 第140页 |
| 7.2.4 细胞增殖活性检测 | 第140页 |
| 7.2.5 表面分子鉴定 | 第140页 |
| 7.2.6 细胞分化潜能检测 | 第140页 |
| 7.2.7 总RNA提取 | 第140-141页 |
| 7.2.8 转录组测序 | 第141-144页 |
| 7.2.9 实时荧光定量PCR检测基因表达 | 第144-146页 |
| 7.3 实验结果 | 第146-169页 |
| 7.3.1 玻璃化冻存影响了MSCs存活率 | 第146-147页 |
| 7.3.2 玻璃化冻存对MSCs形态无影响 | 第147-148页 |
| 7.3.3 玻璃化冻存对MSCs的增殖活性分析 | 第148-149页 |
| 7.3.4 玻璃化冻存对MSCs表面分子无影响 | 第149-152页 |
| 7.3.5 玻璃化冻存对MSCs分化潜能无影响 | 第152-153页 |
| 7.3.6 玻璃化冻存MSCs后RNA纯度和完整性分析 | 第153-154页 |
| 7.3.7 玻璃化冻存后MSCs转录组测序及分析 | 第154-167页 |
| 7.3.8 QRT-PCR验证转录组测序结果 | 第167-169页 |
| 7.4 讨论 | 第169-174页 |
| 本文总结 | 第174-176页 |
| 参考文献 | 第176-190页 |
| 攻读博士学位期间完成的科研成果 | 第190-192页 |
| 致谢 | 第192页 |
