内容摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
第一章 绪论 | 第13-22页 |
1.1 PRRSV的分子生物学 | 第13-17页 |
1.1.1 病毒分类及理化性质 | 第14页 |
1.1.2 病毒基因组结构 | 第14-15页 |
1.1.3 病毒入侵及基因组复制 | 第15-17页 |
1.2 PRRSV编码蛋白 | 第17-19页 |
1.2.1 病毒结构蛋白 | 第17页 |
1.2.2 病毒非结构蛋白 | 第17-19页 |
1.3 宿主蛋白与PRRSV蛋白相互作用的研究 | 第19-20页 |
1.4 研究目的和意义 | 第20-22页 |
第二章 PRRSV Nsp11、 Nsp12与宿主相互作用蛋白的筛选与鉴定 | 第22-33页 |
2.1 材料与方法 | 第22-25页 |
2.1.1 病毒与细胞 | 第22-23页 |
2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
2.1.3 主要方法 | 第23-25页 |
2.2 结果 | 第25-29页 |
2.2.1 病毒诱饵质粒的转化、毒性和自激活检测 | 第25-26页 |
2.2.2 候选蛋白筛选 | 第26-28页 |
2.2.3 回复杂交验证 | 第28页 |
2.2.4 Co-IP验证 | 第28-29页 |
2.3 讨论 | 第29-33页 |
第三章 Galectin-3抑制PRRSV复制的相关研究 | 第33-47页 |
3.1 材料与方法 | 第33-37页 |
3.1.1 病毒与细胞 | 第33页 |
3.1.2 试剂与仪器 | 第33-34页 |
3.1.3 真核质粒的转染 | 第34-35页 |
3.1.4 多步生长曲线 | 第35页 |
3.1.5 间接免疫荧光(IFA) | 第35页 |
3.1.6 SDS-PAGE和WB | 第35-36页 |
3.1.7 基因敲除细胞系的构建 | 第36-37页 |
3.1.8 统计学分析 | 第37页 |
3.2 结果 | 第37-44页 |
3.2.1 Nsp12与Galectin-3的细胞共定位 | 第37-38页 |
3.2.2 PRRSV感染对内源Galectin-3表达的影响 | 第38-39页 |
3.2.3 过表达Galetin-3显著抑制PRRSV复制 | 第39-40页 |
3.2.4 过表达Galetin-3显著抑制病毒N蛋白表达 | 第40-41页 |
3.2.5 Galectin-3对不同基因型和不同毒力的PRRSV毒株均有抑制作用 | 第41-42页 |
3.2.6 Galectin-3基因敲除MARC-145细胞系的鉴定 | 第42-43页 |
3.2.7 Galectin-3基因敲除显著促进PRRSV复制和N蛋白表达 | 第43-44页 |
3.3 讨论 | 第44-47页 |
第四章 Galectin-1抑制PRRSV复制的相关研究 | 第47-61页 |
4.1 材料与方法 | 第47-50页 |
4.1.1 病毒与细胞 | 第47页 |
4.1.2 试剂与仪器 | 第47页 |
4.1.3 真核质粒的转染 | 第47-48页 |
4.1.4 多步生长曲线 | 第48页 |
4.1.5 IFA | 第48页 |
4.1.6 SDS-PAGE和WB | 第48页 |
4.1.7 细胞总RNA的分离提取及反转录 | 第48页 |
4.1.8 相对荧光定量检测 | 第48-49页 |
4.1.9 统计学分析 | 第49-50页 |
4.2 结果 | 第50-59页 |
4.2.1 Nsp11与Galectin-1的细胞共定位 | 第50-51页 |
4.2.2 过表达Galetin-1强烈抑制PRRSV复制 | 第51-52页 |
4.2.3 过表达Galetin-1显著抑制病毒蛋白表达 | 第52-53页 |
4.2.4 Galectin-1具有广谱抗PRRSV作用 | 第53-54页 |
4.2.5 Galectin-1可上调干扰素刺激基因表达 | 第54-55页 |
4.2.6 重组Galectin-1蛋白可显著抑制PRRSV | 第55页 |
4.2.7 过表达Galectin-1对EAV复制的影响 | 第55-56页 |
4.2.8 过表达Galectin-1对PRV JS-2012复制的影响 | 第56-57页 |
4.2.9 过表达Galectin-1对PEDV SH6复制的影响 | 第57-58页 |
4.2.10 过表达Galectin-1对JEV HEN0701复制的影响 | 第58-59页 |
4.2.11 过表达Galectin-1对CSFV石门株复制的影响 | 第59页 |
4.3 讨论 | 第59-61页 |
第五章 全文结论 | 第61-62页 |
致谢 | 第62-63页 |
参考文献 | 第63-72页 |
附录 | 第72-74页 |