| 中文摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 前言 | 第13-24页 |
| 第一节 多发性骨髓瘤简介 | 第13-16页 |
| 第二节 免疫治疗 | 第16-24页 |
| 1. 实验材料 | 第24-29页 |
| 1.1 细胞系和细胞来源 | 第24页 |
| 1.2 质粒载体 | 第24页 |
| 1.3 实验仪器 | 第24-25页 |
| 1.4 试剂和耗材 | 第25-27页 |
| 1.5 溶液配制 | 第27-29页 |
| 2. 实验方法 | 第29-46页 |
| 2.1 细胞复苏 | 第29页 |
| 2.2 细胞株冻存 | 第29-30页 |
| 2.3 细胞传代和换液 | 第30-31页 |
| 2.4 细胞计数 | 第31页 |
| 2.5 MM肿瘤抗原细胞的表达 | 第31-32页 |
| 2.6 CaCl_2法制备DH5α感受态 | 第32-33页 |
| 2.7 构建抗BCMA、抗CD138、抗BCMA-3ST特异性的嵌合抗原受体的病毒载体 | 第33页 |
| 2.8 质粒转化感受态DH5α | 第33-34页 |
| 2.9 使用Qiagen试剂盒大提质粒 | 第34-35页 |
| 2.10 病毒的制备和包装 | 第35-38页 |
| 2.11 小鼠T细胞获取 | 第38-39页 |
| 2.12 人外周血单个核细胞获取 | 第39-40页 |
| 2.13 T细胞激活 | 第40页 |
| 2.14 病毒转染T细胞 | 第40-41页 |
| 2.15 检测CAR-T细胞表达 | 第41页 |
| 2.16 CAR-T细胞增殖实验 | 第41-42页 |
| 2.17 CAR-T细胞与肿瘤细胞共培养时分泌的细胞子检测 | 第42-43页 |
| 2.18 CAR-T细胞杀伤实验 | 第43-44页 |
| 2.19 CAR-T细胞对荷瘤小鼠骨髓瘤的抑制作用 | 第44页 |
| 2.20 CAR-T细胞的纯化 | 第44-46页 |
| 3. 实验结果 | 第46-63页 |
| 第一部分 BCMA抗原在MM细胞系的表达 | 第46页 |
| 第二部分 鼠抗BCMA-CAR-T细胞制备和功能检测 | 第46-52页 |
| 3.1 抗BCMA- CAR的构建 | 第46-47页 |
| 3.2 逆转录病毒包装 | 第47页 |
| 3.3 鼠抗BCMA-CAR表达情况 | 第47-49页 |
| 3.4 鼠抗BCMA- CAR-T细胞体外激活实验 | 第49-50页 |
| 3.5 鼠抗BCMA- CAR-T体外IFN-γ释放实验 | 第50-51页 |
| 3.6 鼠抗BCMA- CAR-T体外增殖实验 | 第51-52页 |
| 3.7 鼠抗BCMA- CAR-T体外杀伤实验 | 第52页 |
| 第三部分 人抗BCMA-CAR-T细胞制备和功能检测 | 第52-56页 |
| 3.8 慢病毒载体抗BCMA -CAR的构建 | 第52-53页 |
| 3.9 人抗BCMA-CAR表达情况 | 第53-54页 |
| 3.10 人抗BCMA-CAR-T细胞体外IFN-γ释放实验 | 第54-55页 |
| 3.11 人抗BCMA-CAR-T细胞体外增殖功能 | 第55-56页 |
| 3.12 人抗BCMA- CAR-T体外杀伤实验 | 第56页 |
| 第四部分 鼠抗CD138-CAR-T细胞制备和功能检测 | 第56-59页 |
| 3.13 逆转录病毒载体抗CD138-CAR的构建 | 第56-57页 |
| 3.14 鼠抗CD138(062)-CAR和鼠抗CD138(46F2)-CAR表达情况 | 第57-58页 |
| 3.15 鼠抗CD138(062)-CAR-T和鼠抗CD138(46F2)-CAR-T体外杀伤骨髓瘤(人源)实验 | 第58-59页 |
| 3.16 鼠抗CD138(46F2)-CAR-T体外杀伤骨髓瘤(鼠源)实验 | 第59页 |
| 第五部分 人抗BCMA-CAR-T和人抗CD138-CAR (062)-T在NOG荷瘤小鼠模型中的研究 | 第59-60页 |
| 第六部分 CAR-T细胞的纯化 | 第60-63页 |
| 3.17 逆转录病毒载体抗BCMA-3ST-CAR的构建 | 第60-61页 |
| 3.18 使用Streptavidin磁珠纯化抗BCMA-3ST-CAR-T细胞 | 第61-62页 |
| 3.19 使用F(ab)2抗体纯化CAR-T细胞 | 第62-63页 |
| 4. 讨论 | 第63-71页 |
| 4.1 肿瘤免疫 | 第63-64页 |
| 4.2 CAR-T细胞疗法 | 第64-65页 |
| 4.3 靶抗原的选择 | 第65-66页 |
| 4.4 CAR结构的选择 | 第66页 |
| 4.5 病毒载体的选择 | 第66-68页 |
| 4.6 抗BCMA-CAR-T和抗CD138-CAR-T体外实验和动物实验结果的讨论 | 第68-69页 |
| 4.7 鼠抗CD138(46F2)-CAR-T体外杀伤骨髓瘤(鼠源)实验的讨论 | 第69-70页 |
| 4.8 CAR-T细胞的纯化 | 第70-71页 |
| 全文结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 文献综述 信号传导在移植物抗宿主病中的研究进展 | 第79-89页 |
| 参考文献 | 第85-89页 |
| 缩略词表 | 第89-90页 |
| 发表文章 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
