| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第一章 综述 | 第8-17页 |
| 1.1 白色念珠菌的生物学特征 | 第8-9页 |
| 1.2 IQGAP1 (Iqg1)生物学功能 | 第9-11页 |
| 1.3 Septin参与调控白色念珠菌胞质分裂 | 第11-13页 |
| 1.4 CYR1的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.5 本实验的研究意义 | 第15-17页 |
| 第二章 实验仪器、实验材料与试剂 | 第17-26页 |
| 2.1 主要实验仪器 | 第17-18页 |
| 2.2 实验材料 | 第18-22页 |
| 2.2.1 载体质粒 | 第18-20页 |
| 2.2.2 菌株 | 第20-22页 |
| 2.3 实验试剂 | 第22-26页 |
| 2.3.1 实验常用试剂 | 第22页 |
| 2.3.2 常用溶液配制表 | 第22-25页 |
| 2.3.3 培养基 | 第25-26页 |
| 第三章 实验方法与步骤 | 第26-53页 |
| 3.1 融合蛋白质粒构建 | 第26-32页 |
| 3.1.1 白色念珠菌基因组的提取 | 第26页 |
| 3.1.2 PCR (polymerase chain reaction)扩增目的片段 | 第26-28页 |
| 3.1.3 目的基因与克隆载体双酶切 | 第28-29页 |
| 3.1.4 连接及转化 | 第29页 |
| 3.1.5 筛选阳性克隆并测序验证 | 第29-31页 |
| 3.1.6 质粒的抽取与双酶切鉴定 | 第31页 |
| 3.1.7 感受态大肠杆菌的制备 | 第31-32页 |
| 3.2 融合蛋白的表达与纯化及晶体初筛实验 | 第32-37页 |
| 3.2.1 融合蛋白菌株的获得及试表达 | 第32-33页 |
| 3.2.2 His标签蛋白的纯化 | 第33-35页 |
| 3.2.3 凝胶过滤层析 | 第35-36页 |
| 3.2.4 晶体初筛实验 | 第36-37页 |
| 3.2.5 GST标签蛋白的纯化 | 第37页 |
| 3.3 离体蛋白结合实验 | 第37-41页 |
| 3.3.1 两种蛋白的获得、结合与吸附[55] | 第37-39页 |
| 3.3.2 蛋白相互作用的负对照 | 第39页 |
| 3.3.3 Western-Blot检测 | 第39-41页 |
| 3.4 白色念珠菌体相关实验 | 第41-50页 |
| 3.4.1 白色念珠菌的转化[48] | 第41-42页 |
| 3.4.2 白色念珠菌基因敲除[34] | 第42-45页 |
| 3.4.3 关闭菌株的构建 | 第45-48页 |
| 3.4.4 在白色念珠菌中标记基因 | 第48-49页 |
| 3.4.5 白色念珠菌菌丝诱导与恢复 | 第49-50页 |
| 3.5 Cdc3的磷酸化研究 | 第50-53页 |
| 3.5.1 突变菌株的构建 | 第50-53页 |
| 第四章 实验结果分析与讨论 | 第53-75页 |
| 4.1 Iqg1功能部分的研究 | 第53-63页 |
| 4.1.1 Iqg1调控分泌相关蛋白Sec3分布 | 第53-57页 |
| 4.1.2 Iqg1对细胞分裂相关蛋白Hof1的影响 | 第57-60页 |
| 4.1.3 Iqg1对Spa2、Cdc3的分布影响 | 第60-63页 |
| 4.2 Cdc3的磷酸化研究 | 第63-67页 |
| 4.2.1 Cdc3关闭菌株的间隔观察 | 第63-64页 |
| 4.2.2 Cdc3磷酸化影响菌丝生长 | 第64-67页 |
| 4.3 Cyr1和Cap1蛋白结构研究 | 第67-74页 |
| 4.3.1 NRA-V28E4,PP2C-V28E4蛋白的纯化 | 第68-70页 |
| 4.3.2 LRR-V28E4,CYCC-V28E4蛋白纯化 | 第70-71页 |
| 4.3.3 Cyr1与Pho81-ANK的体外结合实验 | 第71-72页 |
| 4.3.4 Cap1-N- V28E4蛋白纯化及晶体初筛 | 第72-74页 |
| 4.4 讨论及展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 附录 | 第80-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
