| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略词 | 第25-27页 |
| 1 绪论 | 第27-51页 |
| 1.1 NF-κB通路 | 第29-36页 |
| 1.1.1 NF-κB通路概述 | 第29页 |
| 1.1.2 NF-κB通路的激活 | 第29-32页 |
| 1.1.3 NF-κB通路与癌症 | 第32-36页 |
| 1.2 MMPs家族与MMP9 | 第36-45页 |
| 1.2.1 MMPs家族概述 | 第36-37页 |
| 1.2.2 MMPs家族与癌症进展与转移 | 第37-40页 |
| 1.2.3 MMPs家族与乳腺癌 | 第40-41页 |
| 1.2.4 MMP9概述 | 第41页 |
| 1.2.5 MMP9基因与蛋白结构 | 第41-42页 |
| 1.2.6 MMP9的表达与活性调节 | 第42-44页 |
| 1.2.7 MMP9与乳腺癌转移 | 第44-45页 |
| 1.3 转录因子KLF9概述 | 第45-49页 |
| 1.3.1 KLF9的发现与结构 | 第45-46页 |
| 1.3.2 KLF9的生物学功能 | 第46-48页 |
| 1.3.3 KLF9与癌症 | 第48-49页 |
| 1.4 本文立题依据和研究内容 | 第49-51页 |
| 1.4.1 立题依据 | 第49页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第49-51页 |
| 2 KLF9对乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响 | 第51-67页 |
| 2.1 引言 | 第51页 |
| 2.2 仪器与试剂 | 第51-54页 |
| 2.2.1 仪器与设备 | 第51-52页 |
| 2.2.2 材料与试剂 | 第52-53页 |
| 2.2.3 试剂配制 | 第53页 |
| 2.2.4 菌种、细胞及质粒 | 第53-54页 |
| 2.3 实验步骤与方法 | 第54-62页 |
| 2.3.1 cDNA样品制备 | 第54页 |
| 2.3.2 质粒构建 | 第54-58页 |
| 2.3.3 质粒转化 | 第58页 |
| 2.3.4 质粒提取 | 第58页 |
| 2.3.5 细胞培养 | 第58-59页 |
| 2.3.6 细胞转染 | 第59页 |
| 2.3.7 细胞筛选 | 第59页 |
| 2.3.8 细胞划痕实验 | 第59页 |
| 2.3.9 侵袭小室实验 | 第59-60页 |
| 2.3.10 蛋白样品的制备 | 第60-61页 |
| 2.3.11 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第61页 |
| 2.3.12 Western blot蛋白免疫印迹 | 第61-62页 |
| 2.3.13 统计分析 | 第62页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第62-66页 |
| 2.4.1 KLF9在不同乳腺癌细胞系的表达情况 | 第62-63页 |
| 2.4.2 KLF9对细胞迁移能力的影响 | 第63-64页 |
| 2.4.3 KLF9对细胞侵袭能力的影响 | 第64-66页 |
| 2.5 讨论 | 第66页 |
| 2.6 本章小结 | 第66-67页 |
| 3 KLF9对MMP9的调控作用 | 第67-88页 |
| 3.1 引言 | 第67页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第67-70页 |
| 3.2.1 仪器 | 第67-68页 |
| 3.2.2 试剂 | 第68-69页 |
| 3.2.3 试剂配制 | 第69-70页 |
| 3.2.4 细菌、细胞系以及所用质粒 | 第70页 |
| 3.3 实验方法 | 第70-79页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第70页 |
| 3.3.2 基因组DNA的提取 | 第70页 |
| 3.3.3 质粒构建 | 第70-74页 |
| 3.3.4 cDNA样品制备 | 第74页 |
| 3.3.5 RT-PCR(逆转录PCR) | 第74-75页 |
| 3.3.6 质粒转化 | 第75页 |
| 3.3.7 质粒提取 | 第75页 |
| 3.3.8 细胞转染 | 第75页 |
| 3.3.9 荧光素酶报告基因实验 | 第75-76页 |
| 3.3.10 蛋白样品制备 | 第76页 |
| 3.3.11 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第76页 |
| 3.3.12 蛋白免疫印迹(Western blot,WB) | 第76页 |
| 3.3.13 明胶酶谱实验(Zymography) | 第76页 |
| 3.3.14 染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验 | 第76-79页 |
| 3.3.15 统计分析 | 第79页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第79-86页 |
| 3.4.1 KLF9对MMP9 mRNA及蛋白水平的影响 | 第79-81页 |
| 3.4.2 KLF9对MMP9转录活性的影响 | 第81-82页 |
| 3.4.3 KLF9结合于MMP9启动子作用位点的鉴定 | 第82-85页 |
| 3.4.4 KLF9的DNA结合区域对MMP9转录活性的影响 | 第85-86页 |
| 3.5 讨论 | 第86-87页 |
| 3.6 本章小结 | 第87-88页 |
| 4 KLF9与NF-κB p50/p65之间的相互作用 | 第88-99页 |
| 4.1 引言 | 第88页 |
| 4.2 仪器与试剂 | 第88-91页 |
| 4.2.1 仪器与设备 | 第88-89页 |
| 4.2.2 材料与试剂 | 第89-90页 |
| 4.2.3 试剂配制 | 第90页 |
| 4.2.4 菌种、细胞及质粒 | 第90-91页 |
| 4.3 实验方法 | 第91-93页 |
| 4.3.1 cDNA样品的制备 | 第91页 |
| 4.3.2 质粒构建 | 第91页 |
| 4.3.3 质粒转化 | 第91页 |
| 4.3.4 质粒提取 | 第91页 |
| 4.3.5 细胞培养 | 第91页 |
| 4.3.6 细胞转染 | 第91-92页 |
| 4.3.7 蛋白样品制备 | 第92页 |
| 4.3.8 免疫共沉淀(co-immunoprecipitation, CoIP) | 第92页 |
| 4.3.9 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第92页 |
| 4.3.10 免疫印迹(Western blot, WB) | 第92页 |
| 4.3.11 siRNA-p65的合成 | 第92-93页 |
| 4.3.12 染色质免疫共沉淀 | 第93页 |
| 4.3.13 统计学分析 | 第93页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第93-98页 |
| 4.4.1 KLF9、p50/p65对MMP9启动子活性的影响 | 第93-95页 |
| 4.4.2 外源KLF9与p65之间的相互作用 | 第95页 |
| 4.4.3 外源KLF9与p50之间的相互作用 | 第95-96页 |
| 4.4.4 内源KLF9与NF-κB p50/p65之间的相互作用 | 第96-97页 |
| 4.4.5 KLF9通过p50/p65结合于MMP9启动子NF-κB作用位点 | 第97-98页 |
| 4.5 讨论 | 第98页 |
| 4.6 本章小结 | 第98-99页 |
| 5 KLF9通过招募HDAC1调节NF-κB/MMP9的转录活性 | 第99-109页 |
| 5.1 引言 | 第99页 |
| 5.2 仪器与试剂 | 第99-101页 |
| 5.2.1 仪器 | 第99-100页 |
| 5.2.2 材料与试剂 | 第100-101页 |
| 5.2.3 试剂配制 | 第101页 |
| 5.2.4 细菌、细胞及质粒 | 第101页 |
| 5.3 实验方法 | 第101-103页 |
| 5.3.1 pCMV5-Myc-HDAC1质粒构建 | 第101-102页 |
| 5.3.2 质粒转化 | 第102页 |
| 5.3.3 质粒提取 | 第102页 |
| 5.3.4 细胞培养 | 第102页 |
| 5.3.5 细胞转染 | 第102页 |
| 5.3.6 细胞筛选 | 第102页 |
| 5.3.7 染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation, ChIP) | 第102页 |
| 5.3.8 蛋白样品制备 | 第102页 |
| 5.3.9 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第102页 |
| 5.3.10 免疫印迹(Western blot, WB) | 第102页 |
| 5.3.11 荧光素酶报告基因 | 第102-103页 |
| 5.3.12 免疫共沉淀(co-immunoprecipitation, CoIP) | 第103页 |
| 5.3.13 RT-PCR | 第103页 |
| 5.3.14 统计学分析 | 第103页 |
| 5.4 实验结果与分析 | 第103-107页 |
| 5.4.1 KLF9与HDAC1对MMP9转录活性的影响 | 第103-104页 |
| 5.4.2 KLF9与HDAC1的相互作用 | 第104-105页 |
| 5.4.3 KLF9对HDAC1与p65相互作用的影响 | 第105-106页 |
| 5.4.4 KLF9对NF-κB靶基因转录水平的影响 | 第106-107页 |
| 5.5 讨论 | 第107-108页 |
| 5.6 本章小结 | 第108-109页 |
| 6 KLF9通过下调MMP9抑制乳腺癌的转移 | 第109-118页 |
| 6.1 引言 | 第109页 |
| 6.2 仪器与试剂 | 第109-110页 |
| 6.2.1 仪器与设备 | 第109-110页 |
| 6.2.2 试剂与材料 | 第110页 |
| 6.2.3 试剂配制 | 第110页 |
| 6.2.4 菌体、细胞、样本及质粒 | 第110页 |
| 6.3 实验方法 | 第110-112页 |
| 6.3.1 质粒转化 | 第110页 |
| 6.3.2 质粒提取 | 第110-111页 |
| 6.3.3 细胞转染 | 第111页 |
| 6.3.4 细胞筛选 | 第111页 |
| 6.3.5 细胞划痕实验 | 第111页 |
| 6.3.6 Transwell侵袭小室 | 第111页 |
| 6.3.7 明胶酶谱实验(Zymography) | 第111页 |
| 6.3.8 免疫组化(IHC) | 第111-112页 |
| 6.3.9 统计分析 | 第112页 |
| 6.4 实验结果与分析 | 第112-117页 |
| 6.4.1 MMP9抑制剂Isoginkgetin对KLF9介导的乳腺癌迁移的影响 | 第112-114页 |
| 6.4.2 MMP9抑制剂Isoginkgetin对MMP9蛋白表达及活性的影响 | 第114页 |
| 6.4.3 KLF9与MMP9在人乳腺癌组织中表达的相关性 | 第114-117页 |
| 6.5 讨论 | 第117页 |
| 6.6 本章小结 | 第117-118页 |
| 7 小鼠模型确定KLF9对乳腺癌转移的影响 | 第118-130页 |
| 7.1 引言 | 第118页 |
| 7.2 仪器与试剂 | 第118-120页 |
| 7.2.1 仪器与设备 | 第118-119页 |
| 7.2.2 试剂与材料 | 第119-120页 |
| 7.2.3 试剂配制 | 第120页 |
| 7.2.4 菌种、细胞、动物及质粒 | 第120页 |
| 7.3 实验方法 | 第120-122页 |
| 7.3.1 细胞培养 | 第120页 |
| 7.3.2 质粒转化 | 第120页 |
| 7.3.3 质粒提取 | 第120页 |
| 7.3.4 细胞转染 | 第120页 |
| 7.3.5 细胞筛选 | 第120页 |
| 7.3.6 小鼠肺转移模型 | 第120-121页 |
| 7.3.7 H&E染色(Haris and Eosin staining) | 第121页 |
| 7.3.8 蛋白样品的制备 | 第121-122页 |
| 7.3.9 聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第122页 |
| 7.3.10 蛋白免疫印迹(Western blot) | 第122页 |
| 7.3.11 小鼠肺转移灶的定量 | 第122页 |
| 7.3.12 明胶酶谱实验(Zymography) | 第122页 |
| 7.3.13 统计学分析 | 第122页 |
| 7.4 实验结果与分析 | 第122-128页 |
| 7.4.1 KLF9对BALB/c小鼠体内4T1细胞肺转移能力的影响 | 第122-127页 |
| 7.4.2 KLF9对4T1细胞MMP9表达与活性的影响 | 第127页 |
| 7.4.3 KLF9调节MMP9启动子活性分子机制示意图 | 第127-128页 |
| 7.5 讨论 | 第128-129页 |
| 7.6 本章小结 | 第129-130页 |
| 8 结论与展望 | 第130-132页 |
| 8.1 结论 | 第130-131页 |
| 8.2 创新点 | 第131页 |
| 8.3 展望 | 第131-132页 |
| 参考文献 | 第132-146页 |
| 作者简介 | 第146页 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 | 第146-149页 |
| 致谢 | 第149页 |
