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查尔酮对单增李斯特杆菌以及肺炎链球菌D39分选酶A抑制活性的分子机制研究

摘要第4-7页
abstract第7-9页
第1章 综述第15-41页
    1.1 单增李斯特杆菌病研究进展第15-18页
        1.1.1 单增李斯特杆菌的微生物学特征第15页
        1.1.2 单增李斯特杆菌流行病学研究第15-16页
        1.1.3 单增李斯特杆菌感染的临床症状第16-18页
    1.2 单增李斯特杆菌毒力因子的相关致病性研究第18-22页
        1.2.1 内化素第18-21页
        1.2.2 纤连蛋白结合蛋白 (Fbp A)第21页
        1.2.3 肌动蛋白聚集蛋白第21页
        1.2.4 酰胺酶 (Ami)第21页
        1.2.5 单增李斯特菌溶血素 (LLO)第21-22页
    1.3 单增李斯特杆菌感染的临床治疗方案及其耐药现状第22页
    1.4 肺炎链球菌病研究进展第22-26页
        1.4.1 肺炎链球菌的微生物学特征第22-23页
        1.4.2 肺炎链球菌流行病学研究第23页
        1.4.3 肺炎链球菌毒力因子的相关致病性研究第23-25页
        1.4.4 肺炎链球菌感染的临床治疗方案及其耐药现状第25页
        1.4.5 肺炎链球菌耐药分子机制的研究第25-26页
    1.5 抗感染新策略第26-39页
        1.5.1 对致病菌逃避机体固有免疫系统的途径进行封闭第26页
        1.5.2 抑制革兰氏阴性菌的III型分泌系统第26-27页
        1.5.3 分选酶抑制剂第27-29页
        1.5.4 抑制细菌的密度感受系统第29-39页
    1.6 查尔酮药理活性的研究第39-41页
        1.6.1 抗肿瘤活性第39-40页
        1.6.2 抗菌活性第40页
        1.6.3 抗HIV活性第40页
        1.6.4 抑制肝炎病毒活性第40页
        1.6.5 抗疟作用第40-41页
第2章 单增李斯特杆菌sortase A的结构及查尔酮对其抑制作用分子机制的研究第41-85页
    2.1 LM-srt A的研究意义第41页
    2.2 LM-srt A的克隆、表达、纯化、以及结晶第41-43页
        2.2.1 LM-srt A蛋白的生物信息学分析第41-43页
    2.3 LM-srt A_(△N70)蛋白表达载体的构建第43-45页
        2.3.1 载体信息及表达载体构建策略第43页
        2.3.2 LM-srt A_(△N70)蛋白表达载体的构建第43-45页
    2.4 LM-srt A_(△N70)蛋白的诱导表达第45页
    2.5 LM-srt A_(△N70)蛋白的纯化第45-48页
        2.5.1 菌体破碎第45页
        2.5.2 GST亲和层析第45-46页
        2.5.3 RESOURCE Q阴离子交换层析第46-47页
        2.5.4 凝胶过滤层析第47-48页
        2.5.5 目的蛋白的浓缩以及浓度测定第48页
    2.6 LM-srt A_(△N70)的晶体生长第48-50页
        2.6.1 LM-srt A_(△N70)蛋白晶体的初步筛选第48-49页
        2.6.2 LM-srt A_(△N70)蛋白晶体的优化第49-50页
    2.7 LM-srt A_(△N70)的数据收集与结构解析第50-58页
        2.7.1 LM-srt A_(△N70)蛋白晶体的X射线衍射数据收集和处理第50-52页
        2.7.2 LM-srt A_(△N70)蛋白的结构解析与修正第52-58页
    2.8 LM-Srt A_(△N70)蛋白晶体结构与结构分析第58-61页
        2.8.1 LM-Srt A_(△N70)晶体整体结构分析第58-59页
        2.8.2 LM-Srt A_(△N70)与同源结构的比较第59-61页
    2.9 LM-srt A_(△N70)蛋白功能实验结果与分析第61-65页
        2.9.1 金属离子对LM-srt A_(△N70)蛋白活性的影响第61-65页
    2.10 查尔酮对LM-Srt A_(△N70)蛋白酶活性抑制作用的分子机制研究第65-71页
        2.10.1 查尔酮在体外能够有效抑制LM-Srt A_(△N70)蛋白酶的活性第65页
        2.10.2 查尔酮抑制LM-srt A_(△N70)活性分子机制的研究第65-71页
    2.11 查尔酮对单增李斯特杆菌的抗内化活性体外研究第71-77页
        2.11.1 查尔酮对单增李斯特杆菌最小抑菌浓度(MinimumInhibitory Concentration; MIC)的测定以及生长曲线的绘制第71-72页
        2.11.2 查尔酮能够抑制单增李斯特杆菌内化侵染Caco-2 细胞第72-73页
        2.11.3 荧光标记检测查尔酮抗单增李斯特杆菌内化侵染活性第73-75页
        2.11.4 查尔酮对单增李斯特杆菌细胞毒性作用的抑制活性研究第75-77页
    2.12 查尔酮对单增李斯特杆菌小鼠感染模型的实验治疗学研究第77-82页
        2.12.1 查尔酮对单增李斯特杆菌小鼠感染模型的保护率研究第77-78页
        2.12.2 查尔酮治疗下单增李斯特菌感染小鼠肝脏和脾脏细菌定植数检测第78-79页
        2.12.3 查尔酮单增李斯特菌感染小鼠肝脏和脾脏影响的组织病理学研究第79-82页
    2.13 统计学分析第82页
    2.14 讨论第82-85页
第3章 肺炎链球菌D39分选酶A蛋白结构的研究以及查尔酮抑制活性分子机制的研究第85-111页
    3.1 肺炎链球菌D39分选酶A蛋白的研究目第85页
    3.2 肺炎链球菌D39分选酶A蛋白的克隆,表达纯化以及结晶第85-92页
        3.2.1 肺炎链球菌D39分选酶A蛋白的生物信息学分析第85-87页
        3.2.2 Spn-srt A_(△N81)蛋白表达载体的构建第87-88页
        3.2.3 Spn-srt A_(△N81)蛋白的诱导表达第88页
        3.2.4 Spn-srt A_(△N81)蛋白的纯化第88-92页
    3.3 Spn-srt A_(△N81)晶体的生长第92-93页
        3.3.1 Spn-srt A_(△N81)晶体的初步筛选第92页
        3.3.2 Spn-srt A_(△N81)蛋白晶体的优化第92-93页
    3.4 Spn-srt A_(△N81)蛋白晶体的数据收集与结构解析第93-101页
        3.4.1 Spn-srt A_(△N81)蛋白晶体的X-射线衍射数据收集和处理793.4.2 Spn-srt A_(△N81)蛋白晶体的结构解析与修正第93-101页
    3.5 Spn-srt A_(△N81)蛋白晶体结构与结构分析第101-106页
        3.5.1 Spn-srt A_(△N81)蛋白晶体结构整体分析第101-102页
        3.5.2 与同源结构的比较第102-103页
        3.5.3 同源结构的比较第103-104页
        3.5.4 活性中心的对比第104-106页
    3.6 查尔酮对肺炎链球菌D39分选酶A的抑制活性研究第106-108页
    3.7 讨论第108-111页
第4章 结论第111-113页
参考文献第113-131页
附录A 实验材料和仪器第131-133页
    主要试剂及载体第131页
    主要仪器及工具第131-132页
    结构解析及制图软件第132-133页
附录B 文中英文缩略词第133-135页
博士期间所发表的论文第135-136页
导师简介第136-139页
作者简介第139-140页
致谢第140-141页

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