| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 文中缩略词中英文对照 | 第14-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-32页 |
| 1 我国养猪业的概况 | 第17-18页 |
| 2 养猪业引起的环境污染问题 | 第18-19页 |
| 3 转基因动物研究进展 | 第19-23页 |
| 3.1 显微注射转基因动物 | 第19-20页 |
| 3.2 精子载体法转基因动物 | 第20-21页 |
| 3.3 病毒载体法转基因动物 | 第21-22页 |
| 3.4 体细胞核移植的研究进展 | 第22-23页 |
| 4 手工克隆的研究进展 | 第23-26页 |
| 5 环保转基因猪研究 | 第26-31页 |
| 5.1 植酸和植酸酶 | 第26-29页 |
| 5.2 唾液腺生物反应器 | 第29-31页 |
| 6 本研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| 第二章 转植酸酶基因真核表达载体的构建及鉴定 | 第32-60页 |
| 1 实验材料 | 第32-35页 |
| 1.1 菌种和质粒 | 第32页 |
| 1.2 药品和试剂盒 | 第32-33页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第33页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第33-35页 |
| 2 实验方法 | 第35-49页 |
| 2.1 载体构建的技术路线 | 第35-37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-58页 |
| 3.1 p-PSP-Intron-Cafp转基因载体的构建 | 第49-55页 |
| 3.2 PSP-Cafp-IRES-EGFP转基因载体的构建 | 第55-58页 |
| 4 讨论 | 第58-59页 |
| 5 本章小结 | 第59-60页 |
| 第三章 PSP启动子的功能验证及转基因阳性细胞筛选与鉴定 | 第60-80页 |
| 1 实验材料 | 第60-63页 |
| 1.1 实验样品 | 第60页 |
| 1.2 实验试剂 | 第60-61页 |
| 1.3 实验仪器 | 第61页 |
| 1.4 主要耗材 | 第61-62页 |
| 1.5 配制的溶液和培养基 | 第62-63页 |
| 2 实验方法 | 第63-71页 |
| 2.1 细胞复苏 | 第63页 |
| 2.2 细胞传代 | 第63-64页 |
| 2.3 细胞换液 | 第64页 |
| 2.4 细胞冻存 | 第64页 |
| 2.5 细胞电转及参数 | 第64-66页 |
| 2.6 细胞挑克隆 | 第66页 |
| 2.7 细胞DNA的提取 | 第66-67页 |
| 2.8 细胞PCR鉴定 | 第67-68页 |
| 2.9 LTX试剂转染细胞方法 | 第68页 |
| 2.10 细胞RNA的提取 | 第68-69页 |
| 2.11 细胞RT-PCR检测 | 第69-71页 |
| 3 结果与分析 | 第71-78页 |
| 3.1 PSP启动子在腮腺细胞上的表达验证 | 第71-75页 |
| 3.2 转p-PSP-Intron-Cafp质粒成纤维细胞的筛选与鉴定 | 第75-78页 |
| 4 讨论 | 第78-79页 |
| 5 本章小结 | 第79-80页 |
| 第四章 胚胎成熟培养体系的优化及手工克隆生产转基因猪 | 第80-104页 |
| 1 实验材料 | 第80-88页 |
| 1.1 实验样品 | 第80页 |
| 1.2 实验试剂 | 第80-81页 |
| 1.3 实验仪器 | 第81页 |
| 1.4 主要耗材 | 第81-82页 |
| 1.5 配制的溶液和培养基 | 第82-88页 |
| 2 实验方法 | 第88-92页 |
| 2.1 猪卵巢的采集 | 第88页 |
| 2.2 卵母细胞的采集 | 第88页 |
| 2.3 卵母细胞的体外成熟 | 第88-89页 |
| 2.4 孤雌激活 | 第89页 |
| 2.5 手工克隆 | 第89-91页 |
| 2.6 囊胚细胞计数 | 第91页 |
| 2.7 数据统计分析 | 第91页 |
| 2.8 胚胎移植 | 第91-92页 |
| 3 结果与分析 | 第92-101页 |
| 3.1 猪胚胎成熟培养体系的优化 | 第92-96页 |
| 3.2 转基因猪的制备 | 第96-101页 |
| 4 讨论 | 第101-103页 |
| 5 本章小结 | 第103-104页 |
| 第五章 转基因猪的阳性鉴定 | 第104-138页 |
| 1 实验材料 | 第104-109页 |
| 1.1 实验样品 | 第104页 |
| 1.2 实验试剂 | 第104-105页 |
| 1.3 实验仪器 | 第105-106页 |
| 1.4 配制的溶液和培养基 | 第106-109页 |
| 2 实验方法 | 第109-121页 |
| 2.1 组织DNA提取 | 第109-110页 |
| 2.2 PCR鉴定 | 第110-112页 |
| 2.3 荧光原位杂交检测 | 第112-113页 |
| 2.4 唾液蛋白PAGE检测 | 第113-117页 |
| 2.5 磷消化率的测定 | 第117-119页 |
| 2.6 HE染色及免疫组化实验步骤 | 第119-121页 |
| 3 结果与分析 | 第121-136页 |
| 3.1 转基因猪PCR鉴定 | 第121-124页 |
| 3.2 FISH的结果 | 第124-129页 |
| 3.3 PAGE电泳结果 | 第129-131页 |
| 3.4 磷的表观消化实验 | 第131-133页 |
| 3.5 免疫组化实验结果 | 第133-136页 |
| 4 讨论 | 第136-137页 |
| 5 本章小结 | 第137-138页 |
| 全文总结 | 第138-140页 |
| 参考文献 | 第140-151页 |
| 附录 | 第151-169页 |
| 致谢 | 第169-170页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第170-171页 |
