| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 中英文缩略词表 | 第12-17页 |
| 第一部分 文献综述 | 第17-39页 |
| 第一章 核移植技术的研究进展 | 第17-39页 |
| 1. 影响核移植克隆的因素 | 第17-23页 |
| 1.1 影响核移植技术效率的原因 | 第17-21页 |
| 1.2 影响克隆胚胎的分子机制 | 第21-23页 |
| 2. 表观遗传修饰 | 第23-32页 |
| 2.1 DNA甲基化 | 第24-25页 |
| 2.2 组蛋白修饰 | 第25-28页 |
| 2.3 基因印记 | 第28-30页 |
| 2.4 X染色体失活 | 第30-32页 |
| 3 提高核移植效率的方法 | 第32-35页 |
| 3.1 降低甲基化 | 第32-34页 |
| 3.2 提高乙酰化 | 第34页 |
| 3.3 调控印记基因 | 第34-35页 |
| 4. 雌雄核移植克隆胚胎的印记基因甲基化的研究 | 第35-36页 |
| 4.1 印记基因甲基化对克隆胚胎的影响 | 第35-36页 |
| 4.2 X染色体失活对克隆胚胎的影响 | 第36页 |
| 4.3 供体性别差异对克隆胚胎的影响 | 第36页 |
| 5. 核移植技术的意义 | 第36-37页 |
| 5.1 医疗 | 第37页 |
| 5.2 动物保护 | 第37页 |
| 5.3 科研 | 第37页 |
| 6. 展望 | 第37-38页 |
| 7. 研究目的与意义 | 第38-39页 |
| 第二部分 实验内容 | 第39-130页 |
| 第二章 雌雄水牛成纤维细胞对克隆胚胎发育的影响 | 第40-56页 |
| 前言 | 第41页 |
| 1. 材料与方法 | 第41-49页 |
| 1.1 试验材料 | 第41-42页 |
| 1.2 主要设备仪器及试剂 | 第42-44页 |
| 1.3 试验方法 | 第44-48页 |
| 1.4 试验设计 | 第48-49页 |
| 1.5 统计分析 | 第49页 |
| 2. 结果与分析 | 第49-54页 |
| 2.1 水牛成纤维体细胞(BFF)的性别鉴定 | 第49页 |
| 2.2 比较IVF、ICSI-X、ICSI-Y、SCNT-♀、SCNT-♂胚胎的发育情况 | 第49-50页 |
| 2.3 比较IVF、SCNT-♀、SCNT-♂胚胎的发育速度 | 第50-52页 |
| 2.4 比较ICSI-X、ICSI-Y、SCNT-♀、SCNT-♂桑椹胚、囊胚多能性基因的表达情况 | 第52-54页 |
| 3. 讨论 | 第54-55页 |
| 4. 小结 | 第55-56页 |
| 第三章 雌雄水牛克隆胚胎甲基化差异的研究 | 第56-75页 |
| 前言 | 第57-58页 |
| 1. 材料与方法 | 第58-61页 |
| 1.1 试验材料 | 第58页 |
| 1.2 主要设备仪器及试剂 | 第58页 |
| 1.3 试验方法 | 第58-60页 |
| 1.4 试验设计 | 第60-61页 |
| 1.5 统计分析 | 第61页 |
| 2. 结果与分析 | 第61-72页 |
| 2.1 ~(5m)C、~(5hm)C在IVF、SCNT-♀、SCNT-♂早期胚胎的变化情况 | 第61-65页 |
| 2.2 Dnmts mRNA在ICSI-X、ICSI-Y、SCNT -♀、SCNT -♂早期胚胎的表达 | 第65-66页 |
| 2.3 TETs mRNA在ICSI-X、ICSI-Y、SCNT -♀、SCNT -♂早期胚胎的表达 | 第66-68页 |
| 2.4 H3K9me2、H3K9me3在IVF、SCNT-♀、SCNT-♂早期胚胎的表达情况 | 第68-72页 |
| 3. 讨论 | 第72-74页 |
| 4. 小结 | 第74-75页 |
| 第四章 雌雄水牛克隆胚胎Xist、H19和IGF2的甲基化模式及调控研究 | 第75-103页 |
| 前言 | 第75-77页 |
| 1. 材料与方法 | 第77-85页 |
| 1.1 试验材料 | 第77页 |
| 1.2 主要设备仪器和试剂 | 第77页 |
| 1.3 试验方法 | 第77-84页 |
| 1.4 试验设计 | 第84-85页 |
| 1.5 统计分析 | 第85页 |
| 2. 结果与分析 | 第85-100页 |
| 2.1 Xist、H19、IGF2基因的印记调控序列的克隆 | 第85-87页 |
| 2.2 雌雄BFF印记基因的甲基化 | 第87-89页 |
| 2.3 IVF-X、IVF-Y、SCNT-♀、SCNT-♂早期胚胎印记基因的甲基化 | 第89-91页 |
| 2.4 水牛KDM4B ORF的克隆与分析 | 第91-93页 |
| 2.5 构建KDM4B-pEGFP-N1载体 | 第93-94页 |
| 2.6 过表达KDM4B对SCNT-♀和SCNT-♂胚胎发育的影响 | 第94页 |
| 2.7 过表达KDM4B对雌雄SCNT早期胚胎中的H3K9me2和H3K9me3表达的影响 | 第94-100页 |
| 3. 讨论 | 第100-102页 |
| 4. 小结 | 第102-103页 |
| 第五章 雌雄水牛克隆胚胎印记基因的表达和调控 | 第103-118页 |
| 前言 | 第103-104页 |
| 1. 材料与方法 | 第104-108页 |
| 1.1 试验材料 | 第104页 |
| 1.2 主要设备仪器及试剂 | 第104页 |
| 1.3 试验方法 | 第104-106页 |
| 1.4 试验设计 | 第106-108页 |
| 1.5 统计分析 | 第108页 |
| 2. 结果与分析 | 第108-116页 |
| 2.1 雌雄BFF印记基因的表达 | 第108-109页 |
| 2.2 ICSI-X、ICSI-Y、SCNT♀、SCNT-♂早期胚胎印记基因的表达 | 第109-110页 |
| 2.3 水牛Xist-shRNA-psicoR-GFP载体的构建 | 第110-111页 |
| 2.4 Xist-shRNA-psicoR-GFP在孤雌胚胎的荧光表达情况 | 第111-112页 |
| 2.5 不同浓度Xist-shRNA-psicoR-GFP对孤雌胚胎发育的影响 | 第112-113页 |
| 2.6 不同浓度Xist-shRNA-psicoR-GFP对孤雌胚胎Xist mRNA表达的影响 | 第113-114页 |
| 2.7 Xist-shRNA-5697在SCNT-♀胚胎的荧光表达情况 | 第114-115页 |
| 2.8 不同浓度的Xist-shRNA-5697对SCNT-♀胚胎发育的影响 | 第115页 |
| 2.9 Xist shRNA-5697对SCNT-早胚胎囊胚Xist mRNA表达的影响 | 第115-116页 |
| 3. 讨论 | 第116-117页 |
| 4. 小结 | 第117-118页 |
| 第六章 雌雄克隆水牛印记基因的甲基化和表达情况 | 第118-130页 |
| 前言 | 第119页 |
| 1. 材料与方法 | 第119-121页 |
| 1.1 试验材料 | 第119-120页 |
| 1.2 主要设备仪器及试剂 | 第120页 |
| 1.3 试验方法 | 第120页 |
| 1.4 试验设计 | 第120-121页 |
| 1.5 统计分析 | 第121页 |
| 2. 结果与分析 | 第121-128页 |
| 2.1 雌雄克隆水牛Xist基因的甲基化 | 第121-123页 |
| 2.2 雌雄克隆水牛H19基因的甲基化 | 第123-124页 |
| 2.3 雌雄克隆水牛IGF2基因的甲基化 | 第124-126页 |
| 2.4 雌雄克隆水牛Xist mRNA的表达 | 第126页 |
| 2.5 雌雄克隆水牛H19 mRNA的表达 | 第126-127页 |
| 2.6 雌雄克隆水牛IGF2 mRNA的表达 | 第127-128页 |
| 3. 讨论 | 第128-129页 |
| 4. 小结 | 第129-130页 |
| 全文总结论 | 第130-131页 |
| 参考文献 | 第131-146页 |
| 附件 | 第146-147页 |
| 致谢 | 第147-148页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第148页 |
