| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-21页 |
| 1.1 木聚糖酶的应用及研究 | 第9-13页 |
| 1.1.1 木聚糖酶的应用 | 第9-11页 |
| 1.1.2 木聚糖酶的研究 | 第11-13页 |
| 1.2 聚糖酶分子改造的理论基础 | 第13-16页 |
| 1.2.1 蛋白质定向进化的基本思路 | 第13-14页 |
| 1.2.2 定向进化的常用方法 | 第14-16页 |
| 1.2.3 蛋白质定向进化的理论意义 | 第16页 |
| 1.3 木聚糖酶的结构 | 第16-17页 |
| 1.4 纤维素结合结构域(CBD) | 第17-19页 |
| 1.4.1 CBD家族 | 第18-19页 |
| 1.4.2 CBD的结构和功能 | 第19页 |
| 1.5 融合功能结构域的研究 | 第19-20页 |
| 1.6 立题背景 | 第20-21页 |
| 2 引言 | 第21-22页 |
| 3 材料与方法 | 第22-31页 |
| 3.1 材料 | 第22-23页 |
| 3.1.1 菌株和载体 | 第22页 |
| 3.1.2 试剂与药品 | 第22-23页 |
| 3.1.3 培养基 | 第23页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第23页 |
| 3.2 试验流程 | 第23-24页 |
| 3.2.1 木聚糖酶基因克隆入克隆载体 | 第23页 |
| 3.2.2 木聚糖酶基因克隆入表达载体 | 第23-24页 |
| 3.2.3 重组酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质分析 | 第24页 |
| 3.3 方法 | 第24-31页 |
| 3.3.1 质粒DNA的提取 | 第24-25页 |
| 3.3.2 PCR扩增XYNⅢ | 第25页 |
| 3.3.3 PCR扩增融合基因之XYNⅢ | 第25-26页 |
| 3.3.4 PCR扩增融合基因之CBD | 第26-27页 |
| 3.3.5 PCR扩增融合基因 | 第27页 |
| 3.3.6 重组载体的构建 | 第27-28页 |
| 3.3.7 大肠杆菌阳性转化子的获得 | 第28页 |
| 3.3.8 目的基因在大肠杆菌中的表达检测 | 第28页 |
| 3.3.9 表达产物的纯化 | 第28-29页 |
| 3.3.10 蛋白含量测定 | 第29页 |
| 3.3.11 木聚糖酶活力的测定 | 第29页 |
| 3.3.12 重组木聚糖酶的酶学性质分析 | 第29-31页 |
| 4 结果与分析 | 第31-41页 |
| 4.1 木聚糖酶基因的克隆 | 第31页 |
| 4.1.1 PCR扩增XYNⅢ基因 | 第31页 |
| 4.2 融合酶基因的克隆 | 第31-32页 |
| 4.2.1 PCR扩增融合基因之XYNⅢ基因 | 第31页 |
| 4.2.2 PCR扩增融合基因之CBD基因 | 第31页 |
| 4.2.3 PCR扩增融合基因 | 第31-32页 |
| 4.3 基因的测序与序列比对 | 第32-34页 |
| 4.4 木聚糖酶基因和融合酶的原核表达 | 第34-37页 |
| 4.4.1 PET20B-XYNⅢ和PET20B-XYNⅢ-CBD重组载体的构建 | 第34-35页 |
| 4.4.2 PET20B-XYNⅢ-CBD表达产物检测结果 | 第35-36页 |
| 4.4.3 PET20B-XYNⅢ和PET20B-XYNⅢ-CBD表达产物的纯化结果 | 第36-37页 |
| 4.5 重组木聚糖酶和重组融合酶的酶学性质分析 | 第37-41页 |
| 4.5.1 最适反应温度 | 第37-38页 |
| 4.5.2 温度稳定性 | 第38-39页 |
| 4.5.3 最适PH | 第39页 |
| 4.5.4 PH稳定性 | 第39-40页 |
| 4.5.5 底物特异性 | 第40-41页 |
| 5 结论与讨论 | 第41-43页 |
| 5.1 结论 | 第41页 |
| 5.2 讨论 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-50页 |
| ABSTRACT | 第50页 |
