| 目录 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-14页 |
| 第1章 虹彩病毒综述 | 第14-35页 |
| 1.1 虹彩病毒形态结构 | 第14-16页 |
| 1.2 虹彩病毒科的分类及宿主种类 | 第16-17页 |
| 1.3 虹彩病毒基因组结构 | 第17-18页 |
| 1.4 虹彩病毒蛋白组结构及主要功能基因 | 第18-20页 |
| 1.5 虹彩病毒的增殖 | 第20-24页 |
| 1.6 蛙病毒属研究概况 | 第24-33页 |
| 1.6.1 蛙病毒属主要病毒 | 第24-27页 |
| 1.6.2 蛙病毒属的主要基因 | 第27-33页 |
| 1.7 本课题的目的和意义 | 第33-35页 |
| 第2章 甲鱼虹彩病毒(STIV)病毒分离及理化特性的研究 | 第35-43页 |
| 2.1 材料与方法 | 第35-37页 |
| 2.1.1 病料和细胞系 | 第35页 |
| 2.1.2 病毒的分离和滴度测定 | 第35页 |
| 2.1.3 空斑试验 | 第35-36页 |
| 2.1.4 病毒的理化特性测定 | 第36页 |
| 2.1.5 病毒形态学观察 | 第36页 |
| 2.1.6 病毒的生物学特性测定 | 第36-37页 |
| 2.1.7 病毒的血清学鉴定 | 第37页 |
| 2.2 实验结果 | 第37-42页 |
| 2.2.1 病原分离 | 第37-38页 |
| 2.2.2 病毒的理化特性 | 第38-39页 |
| 2.2.3 电镜观察 | 第39-41页 |
| 2.2.4 病毒的生物学特性 | 第41-42页 |
| 2.2.5 血清学鉴定 | 第42页 |
| 2.3 讨论 | 第42-43页 |
| 第3章 STIV主要衣壳蛋白基因序列分析及蛋白功能研究 | 第43-55页 |
| 3.1 材料与方法 | 第43-46页 |
| 3.1.1 病毒与细胞系 | 第43页 |
| 3.1.2 STIV MCP序列测定 | 第43页 |
| 3.1.3 核酸序列的比较与系统进化分析 | 第43-44页 |
| 3.1.4 药物抑制测定 | 第44页 |
| 3.1.5 原核表达、纯化和多克隆抗体制备 | 第44-45页 |
| 3.1.6 间接免疫荧光法(IF) | 第45页 |
| 3.1.7 病毒中和实验 | 第45页 |
| 3.1.8 WESTERN BLOT分析 | 第45页 |
| 3.1.9 STIV MRNA和病毒滴度的定量检测 | 第45-46页 |
| 3.2 实验结果 | 第46-53页 |
| 3.2.1 PCR扩增 | 第46页 |
| 3.2.2 PCR产物的鉴定和序列测定 | 第46-49页 |
| 3.2.3 STIV MCP基因作为晚期基因的鉴定 | 第49-50页 |
| 3.2.4 MCP原核表达产物鉴定 | 第50-51页 |
| 3.2.5 MCP特异性抗血清的免疫荧光反应 | 第51页 |
| 3.2.6 体外中和实验 | 第51-52页 |
| 3.2.7 MCP基因在EPC细胞内表达的WESTERN-BLOT分析 | 第52-53页 |
| 3.2.8 RT-PCR检测MCP基因在两种不同细胞系中的表达谱 | 第53页 |
| 3.3 讨论 | 第53-55页 |
| 第4章 STIV实时荧光PCR检测方法的建立 | 第55-62页 |
| 4.1 材料与方法 | 第55-57页 |
| 4.1.1 毒株 | 第55-56页 |
| 4.1.2 设备和试剂 | 第56页 |
| 4.1.3 引物和探针的设计与合成 | 第56页 |
| 4.1.4 病毒DNA的抽提 | 第56页 |
| 4.1.5 荧光定量PCR的建立和条件优化 | 第56-57页 |
| 4.1.6 荧光定量PCR的特异性实验、敏感性和重复性 | 第57页 |
| 4.2 结果 | 第57-61页 |
| 4.2.1 荧光定量PCR反应条件的优化 | 第57页 |
| 4.2.2 荧光定量PCR的特异性 | 第57-58页 |
| 4.2.3 荧光定量PCR与普通PCR灵敏度比较 | 第58-59页 |
| 4.2.4 相对标准曲线的建立 | 第59-60页 |
| 4.2.5 荧光定量PCR稳定性和重复性实验 | 第60-61页 |
| 4.3 讨论 | 第61-62页 |
| 第5章 STIV环媒恒温扩增检测方法的建立和应用 | 第62-71页 |
| 5.1 材料和方法 | 第63-65页 |
| 5.1.1 病毒 | 第63页 |
| 5.1.2 引物 | 第63-64页 |
| 5.1.3 病毒DNA的抽提 | 第64页 |
| 5.1.4 LAMP,PCR和real-time PCR反应条件的确定 | 第64-65页 |
| 5.1.5 LAMP特异性实验 | 第65页 |
| 5.1.6 LAMP、PCR和REAL-TIME PCR灵敏度的比较 | 第65页 |
| 5.1.7 LAMP的临床应用 | 第65页 |
| 5.2 结果 | 第65-69页 |
| 5.2.1 LAMP检测条件的确定 | 第65-66页 |
| 5.2.2 LAMP特异性实验 | 第66-67页 |
| 5.2.3.LAMP、PCR和real-time PCR的灵敏度比较 | 第67-69页 |
| 5.2.4 LAMP临床应用评价 | 第69页 |
| 5.3 讨论 | 第69-71页 |
| 第6章 STIV单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立 | 第71-82页 |
| 6.1 材料与方法 | 第71-76页 |
| 6.1.1 病毒、细胞及试验动物 | 第71页 |
| 6.1.2 主要培养基和溶液的配制 | 第71-72页 |
| 6.1.3 酶联免疫吸附试验(ELISA)的相关试剂 | 第72页 |
| 6.1.4 分泌抗STIV单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 | 第72-73页 |
| 6.1.4.1 病毒的大量培养及纯化 | 第72-73页 |
| 6.1.4.2 免疫原的制备 | 第73页 |
| 6.1.4.3 免疫 | 第73页 |
| 6.1.4.4 杂交瘤细胞的建立与阳性克隆的筛选 | 第73页 |
| 6.1.5 单抗的大量制备 | 第73页 |
| 6.1.6 单抗的纯化 | 第73-74页 |
| 6.1.7 单克隆抗体特异性 | 第74页 |
| 6.1.8 兔抗STIV多克隆抗体的制备 | 第74页 |
| 6.1.9 检测STIV ELISA方法的建立 | 第74-75页 |
| 6.1.10 ELISA特异性试验 | 第75页 |
| 6.1.11 临床样品检测 | 第75页 |
| 6.1.12 重复性试验 | 第75-76页 |
| 6.2 结果 | 第76-80页 |
| 6.2.1 杂交瘤的稳定性及分泌单抗的间接ELISA效价 | 第76页 |
| 6.2.2 单克隆抗体的特异性 | 第76-77页 |
| 6.2.3 单克隆抗体亚型的鉴定 | 第77页 |
| 6.2.4 ELISA特异性试验结果 | 第77-78页 |
| 6.2.5 批内重复性试验结果 | 第78页 |
| 6.2.6 批间重复性试验结果 | 第78-79页 |
| 6.2.7 临床样品检测结果 | 第79页 |
| 6.2.8 保质期试验结果 | 第79-80页 |
| 6.3 讨论 | 第80-82页 |
| 第7章 全文总结 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 个人简历 | 第98页 |
