| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-21页 |
| ·M.bovis 病原学 | 第13-14页 |
| ·M.bovis 流行病学 | 第14-15页 |
| ·MbAD 的临床症状 | 第15页 |
| ·MbAD 的病理变化 | 第15-16页 |
| ·MbAD 病的防治 | 第16-17页 |
| ·MbAD 的病原学诊断 | 第17页 |
| ·MbAD 的血清学诊断 | 第17-18页 |
| ·牛支原体疫苗研究进展 | 第18页 |
| ·M.bovis 基因组学及膜表面蛋白相关研究进展 | 第18-20页 |
| ·p28 基因的选择 | 第20页 |
| ·本实验的研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 P28 重组蛋白的原核表达及纯化 | 第21-32页 |
| ·材料 | 第21-23页 |
| ·菌株、质粒 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要设备仪器 | 第21-22页 |
| ·主要溶液及配置 | 第22-23页 |
| ·方法 | 第23-26页 |
| ·M.bovis 菌株扩增与基因组的提取 | 第23页 |
| ·人工感染M.bovis 阳性血清的制备 | 第23-24页 |
| ·p28 基因的克隆 | 第24页 |
| ·pET-28a-p28 重组质粒的构建与鉴定 | 第24-25页 |
| ·重组质粒pET-28a-p28 转化及诱导表达 | 第25页 |
| ·诱导条件的优化 | 第25页 |
| ·蛋白可溶性判断 | 第25-26页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第26页 |
| ·重组蛋白的 Western Blotting 验证 | 第26页 |
| ·结果 | 第26-30页 |
| ·p28 基因 PCR 扩增结果 | 第26-27页 |
| ·pET-28a-p28 重组质粒的鉴定 | 第27页 |
| ·重组质粒pET-28a-p28 的双酶切鉴定结果 | 第27-28页 |
| ·序列测定结果 | 第28页 |
| ·重组蛋白的诱导 | 第28-29页 |
| ·重组蛋白诱导条件的优化 | 第29页 |
| ·重组蛋白可溶性判定 | 第29页 |
| ·重组蛋白的纯化结果 | 第29-30页 |
| ·Western Blotting 检测 | 第30页 |
| ·小结 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 M.bovis 抗体间接 ELISA 方法的建立 | 第32-42页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·菌株和血清 | 第32页 |
| ·生物信息学软件 | 第32页 |
| ·实验设备 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-34页 |
| ·抗原的制备 | 第32页 |
| ·ELISA 方法的建立及条件优化 | 第32页 |
| ·ELISA 操作术式 | 第32-33页 |
| ·最佳抗原包被浓度与被检血清最佳稀释度的确定 | 第33页 |
| ·最佳封闭液的确定 | 第33-34页 |
| ·一抗作用时间的优化 | 第34页 |
| ·酶标二抗作用时间的优化 | 第34页 |
| ·底物显色时间的确定 | 第34页 |
| ·临界值的判定 | 第34页 |
| ·组装试剂盒 | 第34页 |
| ·结果 | 第34-40页 |
| ·重组蛋白抗原的制备及蛋白定量 | 第34页 |
| ·最佳抗原包被浓度与被检血清最佳稀释度的确定 | 第34-35页 |
| ·最佳封闭液与封闭时间的确定 | 第35-36页 |
| ·一抗作用时间的优化 | 第36页 |
| ·酶标抗体（抗牛 IgG-HRP）工作时间的确定 | 第36-37页 |
| ·底物显色时间的确定 | 第37页 |
| ·临界值的判定 | 第37-40页 |
| ·MbH 试剂盒的组装 | 第40页 |
| ·小结 | 第40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 MbH 试剂盒的性能评估及其与其他商品化试剂盒的比较 | 第42-60页 |
| ·材料 | 第42-43页 |
| ·ELISA 试剂盒 | 第42页 |
| ·血清样品 | 第42-43页 |
| ·菌株 | 第43页 |
| ·实验动物 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-45页 |
| ·MbH 试剂盒敏感性实验 | 第43页 |
| ·MbH 试剂盒特异性实验 | 第43页 |
| ·MbH 试剂盒检测临床样品实验 | 第43-44页 |
| ·MbH 试剂盒抗体持续期实验 | 第44页 |
| ·MbH 试剂盒批内重复实验 | 第44页 |
| ·MbH 试剂盒批间重复性实验 | 第44页 |
| ·MbH 试剂盒保存期实验 | 第44-45页 |
| ·MbH 试剂盒与其他商品化试剂盒的比较 | 第45页 |
| ·结果 | 第45-56页 |
| ·MbH 试剂盒敏感性实验 | 第45-46页 |
| ·MbH 试剂盒特异性实验 | 第46-47页 |
| ·MbH试剂盒临床样品检测 | 第47页 |
| ·MbH 试剂盒抗体持续期实验 | 第47页 |
| ·MbH 试剂盒批内重复性结果 | 第47-49页 |
| ·MbH 试剂盒批间可重复试验结果 | 第49-50页 |
| ·MbH 试剂盒保存期实验结果 | 第50-55页 |
| ·MbH 试剂盒与其他两种商品化试剂盒的比较 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-60页 |
| 第5章 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第68页 |
