| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-20页 |
| ·PPRV 研究进展 | 第12-16页 |
| ·全球分布情况 | 第12页 |
| ·病原学 | 第12页 |
| ·分子生物学特征 | 第12-14页 |
| ·诊断方法 | 第14-16页 |
| ·展望 | 第16页 |
| ·胶体金及其应用 | 第16-19页 |
| ·胶体金及制备方法 | 第16-17页 |
| ·胶体金的标记及应用 | 第17-19页 |
| ·本研究目的 | 第19-20页 |
| 第二章 PPRV N 蛋白的分段克隆及表达 | 第20-28页 |
| ·实验材料 | 第20-22页 |
| ·载体 | 第20页 |
| ·试剂及耗材 | 第20页 |
| ·主要溶液的配制 | 第20-21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-25页 |
| ·目的基因的扩增 | 第22-24页 |
| ·目的基因克隆至pEasy-T 载体 | 第24页 |
| ·目的基因连接至pET-32a(+)表达载体 | 第24页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第24-25页 |
| ·表达产物的检测 | 第25页 |
| ·结果 | 第25-27页 |
| ·亚克隆片段的PCR 扩增结果 | 第25页 |
| ·质粒双酶切鉴定结果 | 第25-26页 |
| ·各亚克隆片段的诱导表达 | 第26-27页 |
| ·讨论 | 第27-28页 |
| 第三章 PPRV N 亚单位蛋白的鉴定 | 第28-35页 |
| ·材料 | 第28-29页 |
| ·菌种 | 第28页 |
| ·试剂及耗材 | 第28页 |
| ·溶液的配制 | 第28-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-31页 |
| ·各亚单位蛋白的Western blot 鉴定 | 第29-30页 |
| ·ELISA 检测方法鉴定 | 第30-31页 |
| ·结果 | 第31-33页 |
| ·Western blot 鉴定 | 第31页 |
| ·可溶性分析 | 第31-32页 |
| ·各亚单位蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| ·ELISA 检测 | 第33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 第四章 间接ELISA 检测PPRV 抗体方法的建立 | 第35-44页 |
| ·材料 | 第35-36页 |
| ·血清及试剂盒 | 第35页 |
| ·试剂及耗材 | 第35页 |
| ·主要溶液的配制 | 第35-36页 |
| ·主要仪器设备 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-37页 |
| ·pET-PPRV-N5 蛋白最佳包被浓度及血清最佳稀释倍数的确定 | 第36页 |
| ·最佳封闭试剂的确定 | 第36页 |
| ·血清最佳孵育时间的确定 | 第36页 |
| ·二抗最佳工作浓度的确定 | 第36页 |
| ·二抗最佳作用时间的确定 | 第36页 |
| ·最佳显色时间的确定 | 第36-37页 |
| ·重复性实验 | 第37页 |
| ·特异性实验 | 第37页 |
| ·临床样品的检测 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-42页 |
| ·pET-PPRV-N5 蛋白最佳包被浓度及血清最佳稀释倍数的确定 | 第37-38页 |
| ·最佳封闭剂的确定 | 第38-39页 |
| ·血清最佳孵育时间的确定 | 第39-40页 |
| ·二抗最佳工作浓度的确定 | 第40页 |
| ·二抗最佳作用时间的确定 | 第40页 |
| ·TMB 显色时间的确定 | 第40-41页 |
| ·间接ELISA 具体操作步骤 | 第41页 |
| ·重复性实验 | 第41-42页 |
| ·特异性实验 | 第42页 |
| ·临床样品的检测 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第五章 快速检测PPRV 抗原胶体金试纸条的制备 | 第44-57页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·蛋白、血清和毒株 | 第44页 |
| ·试剂及耗材 | 第44页 |
| ·主要溶液的配制 | 第44-45页 |
| ·主要仪器设备 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-48页 |
| ·PAbs 的纯化 | 第45页 |
| ·胶体金的制备 | 第45页 |
| ·胶体金标记PAbs 最佳pH 值的确定 | 第45-46页 |
| ·胶体金标记PAbs 量最适标记量的确定 | 第46页 |
| ·金标PAbs 的制备及纯化 | 第46页 |
| ·Anti-goat IgG 最佳包被量的确定 | 第46页 |
| ·pET-PPRV-N 蛋白最佳包被浓度的确定 | 第46页 |
| ·胶体金检测卡的制备 | 第46-47页 |
| ·GICA 检测PPRV 病毒 | 第47页 |
| ·GICA 灵敏度实验 | 第47-48页 |
| ·GICA 特异性实验 | 第48页 |
| ·结果 | 第48-55页 |
| ·pET-PPRV-N 蛋白SDS-PAGE 鉴定 | 第48页 |
| ·多抗的纯化 | 第48-49页 |
| ·胶体金的制备 | 第49-50页 |
| ·胶体金标记PAbs 最佳pH 值的确定 | 第50-51页 |
| ·胶体金标记PAbs 最佳标记量的确定 | 第51-52页 |
| ·Anti-goat IgG 包被量的确定 | 第52-53页 |
| ·pET-PPRV-N 蛋白最佳包被量的确定 | 第53页 |
| ·GICA 检测PPRV | 第53-54页 |
| ·GICA 检测灵敏度 | 第54-55页 |
| ·GICA 特异性检测结果 | 第55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第六章 银染增强纳米金核酸探针检测PPRV 核酸 | 第57-65页 |
| ·材料 | 第57-58页 |
| ·主要试剂 | 第57页 |
| ·实验所需试剂的配置 | 第57-58页 |
| ·方法 | 第58-61页 |
| ·核酸探针的设计 | 第58页 |
| ·靶序列的PCR 扩增及纯化 | 第58-59页 |
| ·纳米金颗粒的制备 | 第59页 |
| ·纳米金颗粒与巯基化核酸探针的连接 | 第59页 |
| ·银染增强纳米金核酸探针检测PPRV 实验 | 第59-61页 |
| ·结果 | 第61-64页 |
| ·纳米金的制备及纳米金核酸探针的制备 | 第61-62页 |
| ·PPRV N 基因104 bp 产物的扩增纯化 | 第62页 |
| ·银染显色时间的确定 | 第62-63页 |
| ·银染增强纳米金核酸探针检测极限 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| 第七章 全文结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简介 | 第73页 |
