| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 妊娠早期的胚胎识别和免疫耐受机制的研究进展 | 第12-16页 |
| 1.2.1 反刍动物妊娠识别信号--IFN-tau | 第12-13页 |
| 1.2.2 IFN-tau的子宫外作用 | 第13页 |
| 1.2.3 IFN-tau的抗黄体溶解机制 | 第13页 |
| 1.2.4 孕酮在早期妊娠对机体的免疫耐受作用 | 第13-14页 |
| 1.2.5 孕酮诱导阻断因子介导的妊娠免疫耐受 | 第14页 |
| 1.2.6 PIBF与细胞因子结合参与免疫调节 | 第14页 |
| 1.2.7 PIBF通过干扰素信号通路参与子宫内的免疫调节 | 第14-15页 |
| 1.2.8 孕酮介导其它调节基因参与免疫 | 第15页 |
| 1.2.9 胚胎免疫耐受机制的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3 早期妊娠Th细胞及其细胞因子功能的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3.1 Th1细胞因子与妊娠的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3.2 Th2细胞因子与妊娠的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.4 牛妊娠引起的全身免疫调节机制 | 第18-19页 |
| 1.5 本研究的技术路线和目的、意义 | 第19-21页 |
| 1.5.1 本研究技术路线 | 第19页 |
| 1.5.2 研究目的与意义 | 第19-21页 |
| 第二章 牛外周血单个核细胞表达Th1、Th2免疫因子mRNA的分析 | 第21-32页 |
| 2.1 试验材料与方法 | 第21-22页 |
| 2.1.1 试验动物与分组 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器和设备 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要试剂和耗材 | 第22页 |
| 2.2 试验方法 | 第22页 |
| 2.2.1 PBMCs所需主要溶液的配置 | 第22页 |
| 2.3 样品采集与处理 | 第22-23页 |
| 2.3.1 PBMCs的分离方法 | 第22-23页 |
| 2.4 实时荧光定量PCR检测基因相对表达水平 | 第23-26页 |
| 2.4.1 PBMCs的分离方法 | 第23-24页 |
| 2.4.2 总RNA的提取和RNA浓度及纯度检测 | 第24-25页 |
| 2.4.3 cDNA的合成 | 第25页 |
| 2.4.4 实时荧光定量PCR | 第25-26页 |
| 2.4.5 PCR产物凝胶电泳 | 第26页 |
| 2.5 数据分析 | 第26页 |
| 2.6 结果与分析 | 第26-29页 |
| 2.6.1 牛外周血单个核细胞分离结果 | 第26-27页 |
| 2.6.2 总RNA提取与PCR扩增电泳图 | 第27页 |
| 2.6.3 实时荧光定量PCR目的片段扩增产物鉴定 | 第27-28页 |
| 2.6.4 实时荧光定量PCR结果 | 第28-29页 |
| 2.7 讨论 | 第29-32页 |
| 第三章 蛋白免疫印迹检测 | 第32-39页 |
| 3.1 试验材料与方法 | 第32-33页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第32页 |
| 3.1.2 主要仪器和设备 | 第32页 |
| 3.1.3 主要试剂和药品 | 第32-33页 |
| 3.2 试验方法与步骤 | 第33-35页 |
| 3.2.1 主要试剂配制 | 第33-34页 |
| 3.2.2 Trizol法提取外周血单个核细胞总蛋白 | 第34页 |
| 3.2.3 Bradford法操作步骤 | 第34-35页 |
| 3.2.3.1 绘制标准曲线 | 第34-35页 |
| 3.2.3.2 检测样品蛋白含量 | 第35页 |
| 3.3 SDS-PAGE电泳 | 第35-37页 |
| 3.3.1 灌胶 | 第35页 |
| 3.3.2 点样 | 第35-36页 |
| 3.3.3 电泳 | 第36页 |
| 3.3.4 转膜 | 第36页 |
| 3.3.5 免疫反应 | 第36页 |
| 3.3.6 化学发光、显影、定影 | 第36-37页 |
| 3.4 结果与分析 | 第37-38页 |
| 3.4.1 蛋白质浓度测定结果 | 第37-38页 |
| 3.4.2 Western blot检测结果与分析 | 第38页 |
| 3.5 讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 免疫细胞化学检测 | 第39-43页 |
| 4.1 试验材料 | 第39页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第39页 |
| 4.1.2 试验主要仪器和设备 | 第39页 |
| 4.1.3 试验试剂和耗材 | 第39页 |
| 4.2 试验方法与步骤 | 第39-41页 |
| 4.2.1 主要试剂配制 | 第39页 |
| 4.2.2 免疫细胞化学操作步骤 | 第39-41页 |
| 4.3 试验结果与分析 | 第41-42页 |
| 4.3.1 免疫细胞化学结果 | 第41-42页 |
| 4.4 讨论 | 第42-43页 |
| 第五章 全文总结 | 第43-44页 |
| 5.1 本研究的主要结论和创新 | 第43页 |
| 5.2 下一步研究计划 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-52页 |
| 作者简介 | 第52页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第52-53页 |
