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蓖麻毒素A链和核糖体蛋白P2相互作用的研究及金黄色葡萄球菌中Rot和SaeRDBD的结构生物学研究

摘要第5-7页
ABSTRACT第7-9页
第一篇 蓖麻毒素A链和核糖体蛋白P2相互作用的研究第16-90页
    第1章 综述第16-28页
        1.1 核糖体失活蛋白简介第16-19页
        1.2 核糖体失活蛋白ricin第19-22页
        1.3 核糖体stalk蛋白第22-23页
        1.4 核糖体失活蛋白和核糖体stalk蛋白相互作用的研究第23-24页
        1.5 Ricin和核糖体stalk蛋白相互作用的研究现状第24-28页
    第2章 实验过程第28-64页
        2.1 基因克隆及质粒构建第28-31页
            2.1.1 基因克隆第28-29页
            2.1.2 PCR片段的回收第29页
            2.1.3 酶切和连接反应第29-30页
            2.1.4 连接产物的转化第30页
            2.1.5 抽提质粒与阳性克隆的鉴定第30页
            2.1.6 突变体质粒的构建第30-31页
        2.2 重组蛋白的表达及纯化第31-33页
            2.2.1 重组蛋白的表达第31页
            2.2.2 重组蛋白的纯化第31-33页
        2.3 晶体的生长第33-34页
        2.4 衍射数据的收集及处理第34-39页
            2.4.1 衍射数据的收集第34-35页
            2.4.2 衍射数据的处理第35-39页
        2.5 结构解析和模型修正第39-46页
            2.5.1 结构解析和初步修正第39-42页
            2.5.2 占有率的调整第42-43页
            2.5.3 各向异性温度因子修正第43-44页
            2.5.4 双重构象修正第44-46页
        2.6 结构模型的质量分析第46-60页
            2.6.1 结构模型与电子密度轮廓的吻合情况第46-47页
            2.6.2 结构模型的温度因子分析第47-48页
            2.6.3 结构模型的实空间相关系数分析第48-49页
            2.6.4 结构模型的立体化学分析第49-50页
            2.6.5 不同分辨率结构模型参数的比较第50-53页
            2.6.6 结构模型中分子的比较第53-56页
            2.6.7 各向异性温度因子修正对结构模型的影响第56-60页
        2.7 Pull-down实验第60-61页
        2.8 等温滴定微量热实验第61页
        2.9 RTA抑制核糖体合成蛋白质活性的测定第61页
        2.10 圆二色谱分析第61-64页
    第3章 实验结果与讨论第64-79页
        3.1 整体结构第64-65页
        3.2 Linker对结构的影响第65-66页
        3.3 晶体堆积对结构的影响第66-68页
        3.4 RTA和C10-P2相互作用界面的分析第68-73页
        3.5 RTA与P2相互作用界面影响RTA抑制核糖体合成蛋白质的活性第73-74页
        3.6 DDDM花样对RTA和C10-P2相互作用界面的影响第74页
        3.7 RTA与TCS识别P蛋白模型的比较第74-79页
    本篇小结第79-81页
    参考文献第81-90页
第二篇 金黄色葡萄球菌中毒性调控因子Rot的结构生物学研究第90-160页
    第4章 综述第90-98页
        4.1 金黄色葡萄球菌简介第90-92页
        4.2 SarA及其家族蛋白第92-95页
        4.3 Rot调控因子第95-98页
    第5章 实验过程第98-142页
        5.1 基因克隆及质粒构建第98-100页
            5.1.1 基因克隆第98页
            5.1.2 PCR片段的回收第98-99页
            5.1.3 酶切和连接反应第99页
            5.1.4 连接产物的转化第99页
            5.1.5 抽提质粒与阳性克隆的鉴定第99页
            5.1.6 突变体质粒的构建第99-100页
        5.2 重组蛋白的表达及纯化第100-103页
            5.2.1 重组蛋白的表达第100-101页
            5.2.2 重组蛋白的纯化第101-103页
        5.3 晶体的生长第103-104页
            5.3.1 Rot native蛋白晶体的生长第103-104页
            5.3.2 Rot硒代蛋白晶体的生长第104页
        5.4 衍射数据的收集及处理第104-113页
            5.4.1 衍射数据的收集第104-106页
            5.4.2 衍射数据的处理第106-113页
        5.5 结构解析和模型修正第113-119页
            5.5.1 结构解析和初步修正第113-116页
            5.5.2 占有率的调整第116-117页
            5.5.3 电子密度缺陷区域模型的修正第117-119页
        5.6 结构模型的质量分析第119-133页
            5.6.1 结构模型与电子密度轮廓的吻合情况第119-120页
            5.6.2 结构模型的温度因子分析第120-122页
            5.6.3 结构模型的实空间相关系数分析第122页
            5.6.4 结构模型的立体化学分析第122-124页
            5.6.5 不同分辨率结构模型参数的比较第124-127页
            5.6.6 结构模型中Rot的比较第127-133页
        5.7 Rot-dsDNA复合物的尝试第133-139页
            5.7.1 晶体的生长及衍射数据的收集第133-136页
            5.7.2 衍射数据的处理第136-138页
            5.7.3 结构初步解析及分析第138-139页
        5.8 荧光偏振分析第139-140页
        5.9 分子排阻层析第140页
        5.10 Rot敲除菌株的回补及western blot检测第140-142页
    第6章 实验结果与讨论第142-154页
        6.1 整体结构第142-143页
        6.2 Rot结合dsDNA的特性第143-144页
        6.3 Rot结合dsDNA的作用界面分析第144-146页
        6.4 Rot二体作用界面的分析第146-148页
        6.5 Rot对α-toxm表达的抑制作用分析第148页
        6.6 Rot与SarA家族蛋白的比较第148-154页
            6.6.1 Rot与SarA家族蛋白序列的比较第148-149页
            6.6.2 Rot与SarA家族蛋白的结构比较第149-154页
    本篇小结第154-155页
    参考文献第155-160页
第三篇 金黄色葡萄球菌中SaeR~(DBD)的结构生物学研究第160-214页
    第7章 综述第160-164页
        7.1 双组份调节系统第160-161页
        7.2 SaeR/S双组份调节系统第161-162页
        7.3 SaeR转录调控因子第162-164页
    第8章 实验过程第164-198页
        8.1 基因克隆及质粒构建第164-166页
            8.1.1 基因克隆第164-165页
            8.1.2 PCR片段的回收第165页
            8.1.3 酶切和连接反应第165页
            8.1.4 连接产物的转化第165-166页
            8.1.5 抽提质粒与阳性克隆的鉴定第166页
            8.1.6 突变体质粒的构建第166页
        8.2 重组蛋白的表达及纯化第166-170页
            8.2.1 重组蛋白的表达第166-167页
            8.2.2 重组蛋白的纯化第167-170页
        8.3 晶体的生长第170-172页
        8.4 衍射数据的收集及处理第172-177页
            8.4.1 衍射数据的收集第172-173页
            8.4.2 衍射数据的处理第173-177页
        8.5 结构解析和模型修正第177-181页
            8.5.1 初步解析和修正第177-179页
            8.5.2 占有率调整第179-181页
        8.6 结构模型的质量分析第181-195页
            8.6.1 结构模型与电子密度轮廓的吻合情况第181-182页
            8.6.2 结构模型的温度因子分析第182-183页
            8.6.3 结构模型的实空间相关系数分析第183页
            8.6.4 结构模型的立体化学分析第183-185页
            8.6.5 不同分辨率结构模型参数的比较第185-191页
            8.6.6 结构模型中SaeR~(DBD)的比较第191-195页
        8.7 凝胶迁移分析第195-196页
        8.8 圆二色谱分析第196页
        8.9 分子排阻层析第196页
        8.10 SaeR敲除菌株的回补及α-toxin的检测第196-198页
    第9章 实验结果与讨论第198-208页
        9.1 SaeR~(DBD)整体结构第198-199页
        9.2 SaeR和SaeR~(DBD)结合dsDNA特性的分析第199-201页
        9.3 SaeR和dsDNA相互作用界面的分析第201-203页
        9.4 SaeR正调控α-toxin的表达第203-204页
        9.5 SaeR~(DBD)识别dsDNA可能的机制第204-208页
    本篇小结第208-209页
    参考文献第209-214页
附录第214-430页
致谢第430-432页
在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果第432页

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