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海洋微生物高通量培养和分选技术的建立及应用

摘要第1-8页
Abstract第8-15页
第一章 文献综述第15-59页
 1 海洋环境中微生物的多样性第15-24页
   ·海洋微生物生境第15-17页
   ·海洋微生物的多样性及其分布第17-24页
 2 海洋微生物多样性的研究现状第24-37页
   ·微生物培养的传统方法第24-25页
   ·非培养技术在海洋微生物研究中的应用第25-29页
     ·常见的非培养技术第25-27页
     ·单细胞水平上的研究第27-29页
   ·微生物不能被培养的原因第29-31页
   ·增进微生物可培养性的一些措施第31-37页
     ·在原有培养方式上的改进第31-32页
     ·一些新颖的培养方法第32-37页
 3 研究开发海洋微生物资源的意义第37-40页
   ·海洋微生物酶资源第37-38页
   ·海洋生物活性物质第38-39页
   ·微生物新种属的重要来源第39-40页
 4 细胞微包埋技术第40-54页
   ·细胞微包埋技术简介第40-41页
   ·单细胞微包埋技术第41-44页
   ·海洋微生物微包埋技术的应用第44-48页
     ·海洋微生物生物的培养和多样性分析第44-45页
     ·慢速生长菌株的培养和分离第45页
     ·代谢产物的生产第45-47页
     ·生物传感器第47-48页
   ·包埋材料第48-49页
   ·细胞包埋的方法第49-54页
     ·乳化法(油水乳化,膜乳化)第50-51页
     ·挤出法第51-52页
     ·微流体法第52-54页
 5 海洋细菌的分类与鉴定方法第54-58页
   ·经典的形态特征及生理生化鉴定方法第54-55页
   ·微生物遗传型的鉴定第55-56页
     ·G+C 含的测定第55页
     ·DNA-DNA 杂交第55页
     ·16S rDNA 序列分析第55-56页
     ·其他基因分析第56页
   ·细胞化学成分的鉴定第56-57页
     ·细胞壁化学组分第56页
     ·细胞膜化学组分第56-57页
   ·微生物快速鉴定系统第57-58页
     ·API 鉴定系统第57页
     ·Biolog 系统第57页
     ·VITEK 系统第57-58页
 6 本论文研究的目的和意义第58-59页
第二章 三种适于活细胞包埋的微球制备方法的建立第59-82页
 摘要第59页
 前言第59-60页
 1 实验材料、仪器和方法第60-67页
   ·实验材料和设备第60-61页
   ·实验方法第61-67页
     ·搅拌乳化法实验装置的设计第61页
     ·搅拌乳化法的微球制备第61-62页
     ·两相共流法实验设备的设计第62-63页
     ·两相共流法微球的制备第63-64页
     ·膜乳化法实验装置第64-65页
     ·膜乳化法微球的制备第65-66页
     ·微球稳定性,形态学观察和粒径分布第66-67页
 2 实验结果第67-78页
   ·搅拌乳化法制备微球结果第67-71页
     ·海藻酸钠微球第67-68页
     ·琼脂糖微球第68-69页
     ·结冷胶微球第69-71页
   ·两相共流法微球制备结果第71-73页
     ·海藻酸钠微球第71-72页
     ·琼脂糖微球第72-73页
     ·结冷胶微球第73页
   ·膜乳化法制备微球结果第73-78页
     ·海藻酸钠微球第73-74页
     ·琼脂糖微球第74-76页
     ·结冷胶微球第76-77页
     ·乳化膜和不同膜型号对微球粒径的影响第77-78页
 3 讨论第78-80页
   ·三种微球制备方法技术特点比较第78-80页
   ·三种方法制备微球结果比较第80页
 4 本章小结第80-82页
第三章 海洋微生物高通量培养和分选方法的建立和应用第82-123页
 摘要第82-83页
 前言第83-85页
 1 实验材料、仪器和方法第85-93页
   ·实验仪器第85页
   ·培养基和实验菌株第85-86页
   ·实验方法第86-93页
     ·样品采集和处理第86-87页
     ·样品处理及计数第87-88页
     ·微生物的包埋第88页
     ·模拟原位环境培养第88-89页
     ·光学和荧光显微镜观察第89页
     ·基于FACS 的流式细胞仪分选第89-90页
     ·加富培养和菌种分离纯化第90页
     ·平板分离法第90页
     ·菌种的保藏和活化第90页
     ·16SrDNA 序列分析第90-93页
 2 实验结果第93-114页
   ·计数和镜检结果第93-96页
   ·流式细胞仪分选第96-98页
     ·微球及微克隆信号的确定第96-98页
     ·流式细胞仪分选效率检测和样品加富培养后OD 变化第98页
   ·极地底泥的海洋微生物多样性第98-102页
   ·文昌鱼繁殖区海洋微生物多样性第102-114页
     ·高通量培养法分析文昌鱼繁殖区海水样品结果第102-109页
     ·平板法分离菌株结果第109-114页
 3 讨论第114-121页
   ·高通量培养和分选方法的建立第114-115页
   ·平板法和高通量培养法的比较第115-121页
     ·文昌鱼繁殖区海水中细菌两种培养结果比较第115-119页
     ·泥样分离方法结果比较第119-121页
 4 本章小结第121-123页
第四章 海洋细菌新种—底泥铁单胞菌(Ferrimonas sediminu sp. nov.)的分类鉴定第123-139页
 摘要第123页
 前言第123-124页
 1 实验材料和仪器第124页
   ·实验试剂和培养基第124页
   ·实验仪器第124页
 2 实验方法第124-131页
   ·实验菌株及来源第124-125页
     ·待测菌株JYr13~T第124-125页
     ·与JYr13~T 亲缘关系最近的标准菌株第125页
   ·实验菌株16S rRNA 和gyrB 基因鉴定第125页
   ·实验菌株表型特征鉴定第125-127页
     ·革兰氏染色第125-126页
     ·鞭毛染色第126页
     ·运动性观察第126页
     ·电镜观察第126-127页
   ·实验菌株经典生理生化鉴定第127-130页
     ·盐度试验第127页
     ·温度试验第127页
     ·pH 试验第127页
     ·氧化酶试验第127页
     ·过氧化氢酶试验第127-128页
     ·淀粉酶试验第128页
     ·脂酶试验第128页
     ·明胶酶试验第128页
     ·酪蛋白酶试验第128页
     ·脲酶试验第128-129页
     ·硝酸盐还原实验第129页
     ·H_2S 产生第129页
     ·厌氧实验第129页
     ·利用氢氧化铁,柠檬酸铁和亚硒酸根作为电子受体实验第129-130页
   ·实验菌株API 20NE 快速鉴定系统第130页
   ·BIOLOG 鉴定系统第130页
   ·脂肪酸含量分析第130-131页
   ·G+C 含量测定第131页
 3 实验结果第131-134页
   ·JYr13~T 的表型特征第131页
   ·JYr13~T 的生理生化特征第131-132页
   ·利用氢氧化铁,柠檬酸铁和亚硒酸根作为电子受体实验第132-133页
   ·JYr13~T G+C 的mol%含量第133页
   ·JYr13~T 脂肪酸和醌含量第133页
   ·JYr13~T 165 rRNA 和gyrB 基因测序结果及分析第133-134页
 4 讨论第134-137页
 5 本章小结第137-139页
全文总结第139-141页
创新点第141-142页
展望第142-143页
参考文献第143-158页
攻读博士学位期间的学术成果第158页

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