| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第10-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒 | 第12-13页 |
| 1.2 猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组结构及其编码蛋白 | 第13-14页 |
| 1.3 猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp11 与天然免疫 | 第14-15页 |
| 1.4 PRRSV与细胞凋亡 | 第15页 |
| 1.5 内质网应激与细胞凋亡 | 第15-18页 |
| 1.6 蛋白质组学与PRRSV | 第18-20页 |
| 第2章 研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 第3章 材料与方法 | 第21-40页 |
| 3.1 实验材料 | 第21-26页 |
| 3.1.1 细胞、毒株与菌株 | 第21页 |
| 3.1.2 载体与质粒 | 第21-23页 |
| 3.1.3 工具酶及主要试剂 | 第23-24页 |
| 3.1.4 培养基与抗生素及其配制 | 第24页 |
| 3.1.5 相关缓冲液和试剂及其配制 | 第24-26页 |
| 3.1.6 抗体、及主要化学试剂 | 第26页 |
| 3.1.7 主要实验仪器及设备 | 第26页 |
| 3.1.8 分子生物学分析软件 | 第26页 |
| 3.2 实验方法 | 第26-40页 |
| 3.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第26-27页 |
| 3.2.2 连接产物的转化 | 第27页 |
| 3.2.3 重组蛋白的表达及纯化 | 第27-28页 |
| 3.2.4 SDS-PAGE电泳分析 | 第28-29页 |
| 3.2.5 单克隆抗体的制备 | 第29-31页 |
| 3.2.6 间接酶联免疫吸附试验（ELISA）筛选阳性克隆 | 第31-32页 |
| 3.2.7 阳性杂交瘤细胞的克隆（有限稀释法） | 第32-33页 |
| 3.2.8 单克隆抗体的大量制备 | 第33页 |
| 3.2.9 单克隆抗体（腹水）效价的测定 | 第33页 |
| 3.2.10 Western Blot检测分析 | 第33-34页 |
| 3.2.11 单克隆抗体的间接免疫荧光（IFA）验证 | 第34页 |
| 3.2.12 质粒转染 | 第34页 |
| 3.2.13 双荧光素酶检测实验 | 第34-35页 |
| 3.2.14 重组慢病毒阳性质粒构建 | 第35页 |
| 3.2.15 慢病毒包装 | 第35-36页 |
| 3.2.16 用于蛋白质组学分析的细胞样品的制备 | 第36页 |
| 3.2.17 全细胞蛋白质的提取 | 第36页 |
| 3.2.18 蛋白质的酶解 | 第36页 |
| 3.2.19 iTRAQ 4 plex试剂标记肽段 | 第36-37页 |
| 3.2.20 SCX分离 | 第37页 |
| 3.2.21 基于Triple TOF 5600 的LC -MSMS分析 | 第37-38页 |
| 3.2.22 生物信息学分析 | 第38-39页 |
| 3.2.23 细胞凋亡检测 | 第39-40页 |
| 第4章 结果与分析 | 第40-50页 |
| 4.1 PRRSV Nsp11 的表达及纯化 | 第40-42页 |
| 4.1.1 PRRSV Nsp11 的表达 | 第40页 |
| 4.1.2 PRRSV Nsp11 表达条件的优化 | 第40-42页 |
| 4.1.3 PRRSV Nsp11 的纯化 | 第42页 |
| 4.2 单克隆抗体的制备及验证 | 第42-44页 |
| 4.2.1 间接免疫荧光（IFA）验证抗Nsp11 单克隆抗体 | 第42-43页 |
| 4.2.2 Western Blot验证抗Nsp11 单克隆抗体 | 第43-44页 |
| 4.3 PRRSV感染Marc-145 细胞后Nsp11 的定位 | 第44-45页 |
| 4.4 PRRSV Nsp11 蛋白质组学数据分析及验证 | 第45-50页 |
| 4.4.1 PRRSV Nsp11 慢病毒包装 | 第45页 |
| 4.4.2 蛋白质组学数据的分析 | 第45页 |
| 4.4.3 肽段长度与肽段序列覆盖度 | 第45-46页 |
| 4.4.4 Unique肽段数量分布 | 第46页 |
| 4.4.5 蛋白质组学数据稳定性分析 | 第46-47页 |
| 4.4.6 PRRSV Nsp11 引起caspase3 的上调表达 | 第47页 |
| 4.4.7 PRRSV Nsp11 引起PAM 3D4/21 细胞凋亡 | 第47-48页 |
| 4.4.8 PRRSV Nsp11 引起CHOP基因的表达上调 | 第48-49页 |
| 4.4.9 PRRSV Nsp11 引起PAM 3D4/21 发生内质网应激 | 第49-50页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第50-53页 |
| 5.1 讨论 | 第50-52页 |
| 5.1.1 PRRSV Nsp11 的表达与纯化 | 第50-51页 |
| 5.1.2 PRRSV Nsp11 在Marc-145 细胞中的定位 | 第51页 |
| 5.1.3 PRRSV Nsp11 诱导内质网应激导致细胞凋亡 | 第51-52页 |
| 5.2 结论 | 第52-53页 |
| 附表 | 第53-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
