| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略词 | 第10-15页 |
| 前言 | 第15-22页 |
| 参考文献 | 第18-22页 |
| 第一章 影响HSV复制的表观遗传因素筛选验证及活性评价 | 第22-46页 |
| 引言 | 第22-24页 |
| 1.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 1.1.1 细胞和病毒 | 第24页 |
| 1.1.2 试剂和抗体 | 第24-25页 |
| 1.1.3 小分子化合物贮液的配制 | 第25页 |
| 1.1.4 实验仪器 | 第25页 |
| 1.1.5 耗材 | 第25页 |
| 1.2 实验方法 | 第25-29页 |
| 1.2.1 病毒的感染、扩增及保存 | 第25页 |
| 1.2.2 病毒空斑形成实验 | 第25-26页 |
| 1.2.3 MTT法检测细胞活力 | 第26页 |
| 1.2.4 用于化合物筛选的细胞模型及方法 | 第26-27页 |
| 1.2.5 小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的分离培养 | 第27页 |
| 1.2.6 免疫印迹 | 第27-28页 |
| 1.2.7 统计分析 | 第28-29页 |
| 1.3 实验结果 | 第29-37页 |
| 1.3.1 表观遗传抑制剂库筛选发现BET溴结构域抑制剂能够促进HSV感染复制 | 第29-31页 |
| 1.3.2 病毒学方法验证BET溴结构域抑制剂的促病毒复制活性 | 第31-33页 |
| 1.3.3 BRD4溴结构域抑制剂JQ1剂量依赖性地增加HSV感染复制 | 第33-37页 |
| 1.4 结论 | 第37-38页 |
| 1.5 讨论 | 第38-40页 |
| 参考文献 | 第40-46页 |
| 第二章 BRD4溴结构域抑制剂JQ1促进HSV复制的机制研究 | 第46-99页 |
| 引言 | 第46-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第49-51页 |
| 2.1.1 细胞和病毒 | 第49页 |
| 2.1.2 主要试剂和抗体 | 第49-50页 |
| 2.1.3 小分子化合物贮液的配制 | 第50页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第50页 |
| 2.1.5 耗材 | 第50-51页 |
| 2.2 实验方法 | 第51-60页 |
| 2.2.1 病毒的感染、扩增及保存 | 第51页 |
| 2.2.2 病毒空斑形成实验 | 第51页 |
| 2.2.3 免疫印迹 | 第51页 |
| 2.2.4 细胞免疫荧光 | 第51页 |
| 2.2.5 RNA提取与逆转录 | 第51-52页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR | 第52-53页 |
| 2.2.7 siRNA干扰技术 | 第53-54页 |
| 2.2.8 真核基因表达质粒的构建 | 第54-55页 |
| 2.2.9 Click-iT EdU方法标记新合成病毒基因组 | 第55-57页 |
| 2.2.10 免疫共沉淀(Co-IP)检测蛋白—蛋白相互作用 | 第57页 |
| 2.2.11 染色质免疫沉淀(ChIP)检测蛋白—基因启动子结合 | 第57-59页 |
| 2.2.12 统计分析 | 第59-60页 |
| 2.3 实验结果 | 第60-80页 |
| 2.3.1 JQ1处理不影响细胞组蛋白磷酸化及乙酰化水平 | 第60-61页 |
| 2.3.2 抑制BRD4而非其它BET蛋白的表达显著抑制HSV感染复制 | 第61-66页 |
| 2.3.3 过表达BRD4 BD区截断体蛋白能够促进HSV感染复制 | 第66-68页 |
| 2.3.4 HSV感染诱导细胞内BRD4-P-TEFb-RNAP Ⅱ转录复合物增加 | 第68-70页 |
| 2.3.5 BRD4招募转录调节相关因子至病毒基因启动子区 | 第70-72页 |
| 2.3.6 JQ1处理增加相关转录复合物在病毒基因启动子区募集 | 第72-75页 |
| 2.3.7 BRD4通过募集CDK9活化RNAP Ⅱ调控HSV基因转录 | 第75-78页 |
| 2.3.8 JQ1通过BRD4调节HSV感染复制的机制模式图 | 第78-80页 |
| 2.4 结论 | 第80-81页 |
| 2.5 讨论 | 第81-85页 |
| 参考文献 | 第85-98页 |
| 全文总结 | 第98-99页 |
| 第三章 综述 | 第99-137页 |
| 3.1 疱疹病毒概述 | 第99-106页 |
| 3.1.1 单纯疱疹病毒(HSV)及结构特点 | 第100-101页 |
| 3.1.2 单纯疱疹病毒的复制过程 | 第101-104页 |
| 3.1.3 单纯疱疹病毒的感染特点 | 第104-106页 |
| 3.2 单纯疱疹病毒的裂解感染与潜伏、再激活感染研究 | 第106-110页 |
| 3.2.1 HSV裂解感染发生的分子基础 | 第106-108页 |
| 3.2.2 HSV潜伏感染的建立 | 第108-109页 |
| 3.2.3 HSV的再激活研究 | 第109-110页 |
| 3.3 表观遗传修饰与病毒感染 | 第110-118页 |
| 3.3.1 概述 | 第110-112页 |
| 3.3.2 表观遗传修饰与腺病毒感染 | 第112-113页 |
| 3.3.3 表观遗传修饰与HPV病毒感染 | 第113页 |
| 3.3.4 表观遗传修饰与单纯疱疹病毒(HSV)感染 | 第113-118页 |
| 参考文献 | 第118-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
| 附录 | 第138-139页 |
