| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第16-36页 |
| 1.1 研究背景及研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 1.1.1 研究背景 | 第16页 |
| 1.1.2 研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 1.2 漆酶的研究进展 | 第17-29页 |
| 1.2.1 漆酶的来源 | 第17-19页 |
| 1.2.2 漆酶的异源表达 | 第19-20页 |
| 1.2.3 漆酶的应用 | 第20-25页 |
| 1.2.4 漆酶的固定化 | 第25-29页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌CotA蛋白的研究进展 | 第29-34页 |
| 1.3.1 CotA蛋白漆酶活性的发现 | 第29-30页 |
| 1.3.2 枯草芽孢杆菌CotA蛋白的结构 | 第30-32页 |
| 1.3.3 CotA蛋白的底物结合位点 | 第32-34页 |
| 1.4 本课题的主要研究内容 | 第34-36页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第36-50页 |
| 2.1 实验材料及仪器 | 第36-39页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第36-38页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第38-39页 |
| 2.2 培养基及溶液 | 第39页 |
| 2.3 cotA基因的克隆 | 第39-42页 |
| 2.3.1 枯草芽孢杆菌基因组的提取 | 第39-40页 |
| 2.3.2 PCR扩增cotA基因片段 | 第40-41页 |
| 2.3.3 cotA基因片段的克隆 | 第41-42页 |
| 2.4 构建cotA基因表达载体 | 第42-43页 |
| 2.4.1 载体pMD18-T-cotA和pPICZαB的双酶切 | 第42页 |
| 2.4.2 构建pPICZαB-cotA载体 | 第42-43页 |
| 2.5 毕赤酵母cotA基因转化 | 第43-45页 |
| 2.5.1 毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第43页 |
| 2.5.2 毕赤酵母的电击转化 | 第43-44页 |
| 2.5.3 毕赤酵母转化子筛选 | 第44页 |
| 2.5.4 CotA漆酶的诱导表达 | 第44-45页 |
| 2.6 CotA蛋白的分离纯化 | 第45-46页 |
| 2.6.1 粗酶液的浓缩 | 第45页 |
| 2.6.2 层析纯化CotA蛋白 | 第45-46页 |
| 2.7 CotA蛋白漆酶活性测定 | 第46页 |
| 2.8 CotA蛋白催化靛蓝胭脂红脱色检测 | 第46-47页 |
| 2.9 CotA蛋白在磁性孢子微球上的固定化 | 第47-48页 |
| 2.9.1 灵芝孢子中空微球的制备 | 第47页 |
| 2.9.2 磁性孢子微球的制备 | 第47页 |
| 2.9.3 CotA蛋白的固定 | 第47-48页 |
| 2.10 CotA蛋白胆红素氧化酶活性测定 | 第48页 |
| 2.11 电化学检测 | 第48-50页 |
| 第3章 CotA蛋白的毕赤酵母异源表达和分离纯化 | 第50-68页 |
| 3.1 引言 | 第50-51页 |
| 3.2 cotA基因的克隆及序列分析 | 第51-59页 |
| 3.2.1 枯草芽孢杆菌基因组DNA提取 | 第51页 |
| 3.2.2 枯草芽孢杆菌cotA基因的PCR扩增 | 第51-53页 |
| 3.2.3 cotA基因片段的克隆 | 第53-54页 |
| 3.2.4 cotA基因片段的序列分析 | 第54-59页 |
| 3.3 cotA基因表达载体的构建和转化 | 第59-62页 |
| 3.3.1 cotA基因酵母分泌表达载体的构建 | 第59-62页 |
| 3.3.2 毕赤酵母的cotA基因转化和筛选 | 第62页 |
| 3.4 CotA蛋白的诱导表达和纯化 | 第62-67页 |
| 3.4.1 CotA蛋白的诱导表达 | 第62-64页 |
| 3.4.2 CotA蛋白的分离纯化 | 第64-66页 |
| 3.4.3 纯化产物的质谱鉴定 | 第66-67页 |
| 3.5 本章小结 | 第67-68页 |
| 第4章 CotA蛋白的漆酶催化活性及其催化靛蓝胭脂红脱色研究 | 第68-88页 |
| 4.1 引言 | 第68-69页 |
| 4.2 CotA蛋白的漆酶催化活性研究 | 第69-79页 |
| 4.2.1 CotA蛋白漆酶活性检测 | 第69-70页 |
| 4.2.2 溶液pH对CotA漆酶活性和稳定性的影响 | 第70-72页 |
| 4.2.3 温度对CotA漆酶活性和稳定性的影响 | 第72-75页 |
| 4.2.4 有机溶剂对CotA漆酶活性的影响 | 第75-76页 |
| 4.2.5 CotA漆酶酶促反应动力学 | 第76-79页 |
| 4.3 CotA催化靛蓝胭脂红的脱色研究 | 第79-87页 |
| 4.3.1 CotA催化靛蓝胭脂红脱色能力检测 | 第79-80页 |
| 4.3.2 影响靛蓝胭脂红脱色的因素分析 | 第80-81页 |
| 4.3.3 响应面法优化靛蓝胭脂红脱色条件 | 第81-86页 |
| 4.3.4 靛蓝胭脂红脱色产物分析 | 第86-87页 |
| 4.4 本章小结 | 第87-88页 |
| 第5章 CotA蛋白在磁性灵芝孢子微球上的固定化及其染料脱色应用 | 第88-101页 |
| 5.1 引言 | 第88-89页 |
| 5.2 中空灵芝孢子微球的制备和表征 | 第89-91页 |
| 5.2.1 中空灵芝孢子微球的制备和结构观察 | 第89-90页 |
| 5.2.2 中空灵芝孢子微球组成分析 | 第90-91页 |
| 5.3 CotA蛋白在磁性灵芝孢子微球上的固定化 | 第91-98页 |
| 5.3.1 负载Fe_3O_4纳米粒子的灵芝孢子微球制备及表征 | 第91-95页 |
| 5.3.2 磁性孢子微球对CotA蛋白的吸附固定 | 第95-98页 |
| 5.4 固定化CotA蛋白在靛蓝胭脂红脱色中的应用 | 第98-100页 |
| 5.4.1 固定化CotA蛋白对靛蓝胭脂红的脱色 | 第98-99页 |
| 5.4.2 固定化CotA蛋白的重复使用 | 第99-100页 |
| 5.5 本章小结 | 第100-101页 |
| 第6章 CotA蛋白的胆红素氧化酶催化活性及其电催化性能研究 | 第101-117页 |
| 6.1 引言 | 第101-102页 |
| 6.2 CotA蛋白胆红素氧化酶催化活性研究 | 第102-109页 |
| 6.2.1 CotA蛋白催化胆红素氧化 | 第102-103页 |
| 6.2.2 CotA蛋白催化氧气还原 | 第103-105页 |
| 6.2.3 溶液pH值对CotA胆红素氧化酶活性和稳定性的影响 | 第105-106页 |
| 6.2.4 温度对CotA胆红素氧化酶活性和稳定性的影响 | 第106-108页 |
| 6.2.5 CotA胆红素氧化酶酶促反应动力学研究 | 第108-109页 |
| 6.3 CotA蛋白电催化性能研究 | 第109-115页 |
| 6.3.1 CotA蛋白对O_2的电催化还原 | 第109-110页 |
| 6.3.2 CotA蛋白催化O_2还原机理讨论 | 第110-114页 |
| 6.3.3 CotA酶传感器对H_2O_2的定量检测 | 第114页 |
| 6.3.4 CotA修饰电极的稳定性 | 第114-115页 |
| 6.4 本章小结 | 第115-117页 |
| 结论 | 第117-119页 |
| 创新点 | 第118页 |
| 展望 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-136页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文及其它成果 | 第136-138页 |
| 致谢 | 第138-139页 |
| 个人简历 | 第139页 |
