摘要 | 第6-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
缩略语表 | 第9-10页 |
1 前言 | 第10-23页 |
1.1 研究问题的由来 | 第10页 |
1.2 文献综述 | 第10-22页 |
1.2.1 苏云金芽胞杆菌 | 第10-12页 |
1.2.2 细菌的信号转导系统 | 第12-14页 |
1.2.3 细菌中核酸类第二信使 | 第14-15页 |
1.2.4 c-di-GMP(环二鸟苷酸) | 第15-16页 |
1.2.5 c-di-GMP riboswitches | 第16-17页 |
1.2.6 细菌的运动与粘附 | 第17-21页 |
1.2.7 生物膜的形成 | 第21-22页 |
1.3 研究的目的和意义 | 第22-23页 |
2 材料和方法 | 第23-33页 |
2.1 材料 | 第23-27页 |
2.1.1 菌株 | 第23-24页 |
2.1.2 质粒 | 第24-25页 |
2.1.3 引物 | 第25-26页 |
2.1.4 试剂与仪器 | 第26页 |
2.1.5 培养基与缓冲液 | 第26-27页 |
2.2 研究方法 | 第27-33页 |
2.2.1 质粒抽提 | 第27页 |
2.2.2 基因组DNA抽提(CTAB法) | 第27-28页 |
2.2.3 酶切 | 第28页 |
2.2.4 切胶回收与纯化 | 第28页 |
2.2.5 连接 | 第28页 |
2.2.6 感受态的制备 | 第28页 |
2.2.7 转化与转化子的验证 | 第28-29页 |
2.2.8 β-半乳糖苷酶活性的测定 | 第29页 |
2.2.9 蛋白质浓度的测定 | 第29页 |
2.2.10 生物膜的形成 | 第29-30页 |
2.2.11 I-SceI介导的基因敲除 | 第30-31页 |
2.2.12 运动性(Swarm试验) | 第31页 |
2.2.13 趋化性(毛细管法) | 第31-32页 |
2.2.14 胶原粘附试验 | 第32-33页 |
3 结果与分析 | 第33-47页 |
3.1 生物信息学分析 | 第33-39页 |
3.1.1 c-di-GMP riboswitches的分布 | 第33-34页 |
3.1.2 c-di-GMP riboswitches的调控机理 | 第34-35页 |
3.1.3 c-di-GMP riboswitches的调控机理下游基因的转录情况 | 第35页 |
3.1.4 下游基因的功能分析 | 第35-38页 |
3.1.5 c-di-GMP信号蛋白 | 第38-39页 |
3.2 c-di-GMP riboswitches介导的的转录调控 | 第39-42页 |
3.2.1 最小转录调控区查找 | 第39-41页 |
3.2.2 c-di-GMP riboswitches的作用 | 第41-42页 |
3.3 下游基因的功能研究 | 第42-47页 |
3.3.1 基因敲除突变体的构建 | 第42-43页 |
3.3.2 表型观察 | 第43-45页 |
3.3.3 趋化性 | 第45页 |
3.3.4 胶原粘附试验 | 第45-46页 |
3.3.5 基因回补 | 第46-47页 |
4 讨论 | 第47-49页 |
参考文献 | 第49-56页 |
附录 | 第56-64页 |
致谢 | 第64页 |